方法: NSCLC 细胞 NCI-H1975、NCI-H1781、HCC827 和 A549 用 Afatinib (0.0001-10 µM) 处理 72 h，通过 MTS assay 检测细胞活力。
结果: Afatinib 抑制携带野生型 (H1666) 或 L858R/T790M (NCI-H1975) EGFR 的肿瘤细胞系的存活。Afatinib 对表达 HER2 776insV (NCI-H1781) 或 EGFR E746_A750del (HCC827) 的 NSCLC 细胞系同样有效，但对表达野生型 EGFR 和 HER2 但同时携带致癌 Kras G12S 点突变的 A549 细胞没有活性。[1]
方法: 过表达野生型或突变型 HER2 的 BEAS-2B 细胞用 Afatinib (0.1 µM) 处理 6 h，通过 Western Blot 检测靶点蛋白表达水平。
结果: Afatinib 治疗抑制了 HER2、EGFR 和 AKT 的磷酸化。[2]

方法: 为检测体内抗肿瘤活性，将 Afatinib (20 mg/kg，1.8% HP-beta-CD + 5% acetic acid (10%) + aqueous Natrosol (0.5%)) 灌胃给药给携带 A431 异种移植物的 NMRI-nu/nu 小鼠，每天一次，持续 25 天。
结果: Afatinib 导致肿瘤显著消退，累计治疗/对照肿瘤体积比 (T/C 比) 为 2%，EGFR 和 AKT 磷酸化下调。[1]