腺病毒包装服务

腺病毒（Adenovirus）结构

腺病毒呈无包膜的球形结构，线状双股 DNA 与核心蛋白形成核心，被包裹于衣壳内。衣壳呈二十面体对称结构，由 252 个壳粒组成，壳粒排列在三角形的面上，其中 240 个为六邻体（hexon，非顶点壳粒），另外 12 个为五邻体（penton，顶点壳粒），位于病毒粒的 12 个顶端。纤维突起是从每个五邻体基底上由衣壳面伸出的线状突起，长约 9~77.5 nm，包含一个头节区和茎部结构[1-2]。五邻体和纤毛的头节区可与细胞表面的受体结合，在病毒感染细胞过程中起着非常重要的作用。腺病毒的立体结构如右图所示[3]：

腺病毒（Adenovirus）基因组

腺病毒是一种双链线性的 DNA 病毒，其基因组长度约为 36kb。基因组两端各有一个 103bp 的反向末端重复序列(inverted terminal repeat, ITR)，参与病毒 DNA 的复制；ITR 的内侧为病毒包装信号Ψ和主要晚期启动子（MLP），参与腺病毒基因组的衣壳化。基因组包含早期表达的与腺病毒复制相关的 E1~E4 基因和晚期表达的与腺病毒颗粒组装相关的 L1~L5 基因。对 E4 区域进行放大展示其剪接产物：E4orf1、E4orf2、E4orf3、E4orf4、E4orf3/4、E4orf6、E4orf6/7。红色标注的蛋白为人腺病毒（HAdV）癌基因。HAdV 腺病毒基因组的示意图如右图所示[5]：

腺病毒（Adenovirus）感染细胞的过程

腺病毒感染细胞的第一步是通过纤突蛋白与细胞表面 CAR 结合。研究表明 CAR 和腺病毒的纤维突起结合并在上皮细胞之间的紧密结构和附着点发挥作用。左图是腺病毒感染细胞的示意图[6]：

腺病毒（Adenovirus）的特点

• 感染范围广：腺病毒可适用于普通细胞系的感染，也可用于悬浮细胞、原代细胞等
• 理化性质稳定：腺病毒可适用于普通细胞系的感染，也可用于悬浮细胞、原代细胞等
• 感染效率高：在最佳感染条件下，感染率可达100%
• 载体容量大：腺病毒的载体容量较大，最高可达8kb
• 感病毒滴度高：腺病毒滴度纯化、浓缩后可达1012-13vp/ml(1010-11pfu/ml)
• 安全稳定：不整合到染色体中，无插入致突变性

腺病毒（Adenovirus）包装服务的流程

陶术生物采用的包装系统包括了 AdEasy 和 AdMax 系统。其中 AdMax 系统操作简便、重组效率高、获得的病毒产率也高，故成为目前腺病毒包装主要采用的系统。腺病毒（Adenovirus）包装服务的流程示意图如左图所示：

腺病毒（Adenovirus）包装服务的质控

陶术生物拥有十余年的腺病毒包装经验，提供从腺病毒基因序列分析、质粒设计和构建、腺病毒包装和表达、浓缩纯化到滴度测定的全流程服务。全套的腺病毒载体和表达系统可用于体内外表达多物种 ORF、lncRNA、circRNA、shRNA 和 CRISPR/gRNA，可满足客户多维度的实验需求。

引用文献

• [1] Adhikary AK, Banik U, Okabe N, et al. Molecular characterization· 6 ·of human adenovirus type 8 (HAdV-8), including a novel genome type detected in Japan［J］. Jpn J Infect Dis, 2011, 64(6):493-8.
• [2] Selvaraju SB, Kovac M, Dickson LM, et al. Molecular epidemiology and clinical presentation of human adenovirus infections in Kansas City children［J］. J Clin Virol, 2011, 51(2):126-31.
• [3] Gallardo J, Pérez-Illana M, Martín-González N, San Martín C. Adenovirus Structure: What Is New?Int J Mol Sci. 2021 May 15;22(10):5240. doi: 10.3390/ijms22105240. PMID: 34063479; PMCID:PMC8156859.
• [4] Kulanayake S, Tikoo SK. Adenovirus Core Proteins: Structure and Function. Viruses. 2021 Feb28;13(3):388. doi: 10.3390/v13030388. PMID: 33671079; PMCID: PMC7998265.
• [5] Göttig L, Schreiner S. E4orf1: The triple agent of adenovirus - Unraveling its roles in oncogenesis,infectious obesity and immune responses in virus replication and vector therapy. Tumour Virus Res.2024 Jun;17:200277. doi: 10.1016/j.tvr.2024.200277. Epub 2024 Feb 28. PMID: 38428735; PMCID:PMC10937242.
• [6] Greber UF, Gomez-Gonzalez A. Adenovirus - a blueprint for gene delivery. Curr Opin Virol. 2021Jun;48:49-56. doi: 10.1016/j.coviro.2021.03.006. Epub 2021 Apr 20. PMID: 33892224.