• 造模机制：

  (RS)-(Tetrazol-5-yl)glycine (TZG）作为强效 NMDA 受体激动剂，通过多重机制诱导病理：① 过度启动纹状体神经元 NMDA 受体，引发兴奋性毒性，导致细胞内钙超载（Ca²⁺ influx 升高），破坏神经元稳态；② 诱导内皮细胞 COX-2 表达，招募中性粒细胞浸润至损伤区域，中性粒细胞表达前列环素合酶（PGIS）并产生前列环素（PGI₂），形成 “内皮 COX-2-中性粒细胞-PGI₂” 的神经保护通路；③ 引发纹状体区域炎症反应（CD45⁺ 白细胞浸润），同时导致脑组织损伤灶形成，模拟癫痫发作相关的兴奋性脑损伤病理特征。

• 相关产品：

  (RS)-(Tetrazol-5-yl)glycine (T16801)

• 造模方法：

  实验对象：

  小鼠, COX-2^flox/flox、Tie2Cre COX-2^flox/flox、LysMCre COX-2^flox/flox（条件敲除鼠）, 10-16 周龄, 体重 25-30g

  给药剂量和方式：

  ① 核心造模：(RS)-(Tetrazol-5-yl)glycine（5 μM）, 10 μL / 只, 溶于 PBS（pH7.4）, 右侧纹状体立体定位注射（坐标：前囟前 0.5 mm、旁开+2.0 mm、腹侧-4.0 mm）, 单剂量给药；
  ② 手术操作：戊巴比妥钠（100 mg/kg）腹腔麻醉，立体定位仪固定头部，颅骨钻孔后用微量注射系统按 0.8 μL/min 速度注射，留针 5 分钟防止药液回流，术后缝合伤口；
  ③ 对照处理：等体积 PBS, 同方式注射；
  ④ 干预验证（可选）：
  - PGI₂ 激动剂 MRE-269（1 mg/kg）, 腹腔注射, 造模前 1/4 小时或造模后给药；
  - PGIS 抑制剂反苯环丙胺（10 mg/kg）, 腹腔注射, 造模前 1 小时给药

  给药频率和周期：

  单剂量 (RS)-(Tetrazol-5-yl)glycine 注射

• 模型验证：

  病理指标： 组织损伤：HE 染色显示纹状体区域出现明显损伤灶，损伤体积在造模后 24 小时达峰值，反苯环丙胺干预可扩大损伤体积，MRE-269 可缩小损伤体积（P<0.05）； 分子指标：造模后 12 小时，野生型小鼠纹状体 PGI₂稳定代谢产物（6 - 酮前列腺素 F1α）水平升高 2 倍（P<0.01），Tie2Cre COX-2^flox/flox 小鼠升高不显著；CD45⁺ 白细胞、Ly6G⁺ 中性粒细胞浸润增加，PGIS⁺ 细胞在损伤灶核心聚集； 细胞指标：钙成像显示 TZG 可诱导纹状体神经元钙 influx 显著升高（设为 100%），MRE-269 预处理可使钙 influx 振幅及曲线下面积显著降低（P<0.01）； 特异性验证：Tie2Cre COX-2^flox/flox 小鼠（内皮 COX-2 敲除）中，TZG 诱导的 PGI₂生成减少、PGIS⁺ 细胞浸润缺失，损伤灶扩大，证实内皮 COX-2 依赖的神经保护通路。

*注意事项：取材时按时间点（4/8/12/24 小时）处死，新鲜脑组织需冰上操作。

*参考文献：An Y,et,al. Prostacyclin mediates endothelial COX-2-dependent neuroprotective effects during excitotoxic brain injury. J Inflamm Res. 2014 May 21;7:57-67.