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很棒
问用磁珠免疫沉淀后，检测有多条非特异条带？
答有非特异性的蛋白结合在磁珠上。建议：在Washing Buffer中加入50-350mM NaCl。加大洗脱力度和次数。
问用磁珠免疫沉淀后获得的蛋白量低？
答a. 蛋白质被降解。建议：加入蛋白酶抑制剂。
b. 所使用的磁珠量不够。建议：提高捕获免疫复合物所使用的磁珠量。
c. 样品中的目标蛋白量不够。建议：提高抗原样品量。
问在免疫共沉淀（IP）实验中，目标蛋白分子量发生变化的原因？
答复合物形成：目标蛋白可能与其他蛋白结合，形成复合物，从而改变其分子量。
蛋白降解：目标蛋白可能被酶降解，导致分子量变化。
蛋白修饰：目标蛋白在免疫共沉淀前后可能发生了修饰，如磷酸化或乙酰化，影响分子量。
解决方案：若目标蛋白在免疫共沉淀前后分子量发生变化，可以进行验证实验，如Western blot或质谱分析。此外，在实验前可对样品进行处理，如使用蛋白酶抑制剂，避免过度处理样品，尽量减少目标蛋白的降解和修饰。
问免疫沉淀试剂盒中的Elution Buffer是什么成分？后续可以做质谱吗？
答Elution Buffer含有甘氨酸，呈酸性条件。洗脱产物可以进行质谱分析。可以在洗脱时加入NaOH进行中和，强酸或强碱会导致产物变性。
问如何避免磁珠在储存或使用过程中可能出现的聚集情况？
答磁珠应保存在2～8℃，使用时应避免由于污染而导致的不可逆聚集，或因干燥而导致的聚集。磁珠在低pH的洗脱缓冲液中发生聚集属于正常现象，不影响磁珠的正常使用。在缓冲液中添加终浓度为0.1% (v/v)的非离子型去垢剂（如NP-40、Tween-20或Triton X-100）可有效防止磁珠聚集。经过低pH洗脱操作的磁珠可以用Washing Buffer洗涤至中性，然后用含有0.1% (v/v) Tween-20的Tris buffer（pH7.5）振荡重悬磁珠，并用超声波水浴处理2 min，即可使磁珠恢复均匀状态，以上处理均不影响磁珠的抗体结合效率。
注：超声处理也会使磁珠在样品溶液中捕获的抗体脱落，所以磁珠在加样后洗脱前不宜使用该方法。
问三款 RIPA 裂解液有什么区别？
答RIPA 裂解液(强)、RIPA 裂解液(中)、RIPA 裂解液(弱)的有效裂解成分、裂解强度不同，建议查询官网，有三款RIPA裂解液的比较表。
问Cocktail 系列的使用方法？
答在室温下解冻，开盖前请低速离心一下，以便将黏附于管壁的液体甩至管底。然后在实验前以 1:100（v/v）稀释至溶液样品（细胞裂解液或组织提取液）。
问使用 CCK8 进行实验后，发现读值低，不变色、没差异等，应该怎么办？
答CCK8 在孵育 1-4 小时后，OD 读值在 1-2 之间为佳，线性关系比较好。关于 CCK8 的使用问题，通常建议调整细胞状态、增加种板数量、改变加药浓度、延长孵育时间等。
问蛋白酶抑制剂 cocktail C0001 使用时加到蛋白液中的有效抑制时间有多久？
答这个我们暂时没有准确的数据，因为它对不同样品不同蛋白的保护程度是不一样的。一般单次提取以后，不加蛋白酶抑制剂 cocktail 的样品蛋白会在 24 h 后发生明显降解，加了蛋白酶抑制剂 cocktail 的样品蛋白可以维持 48 h 不降解。如果提取后置于 -20℃ 储存的话，一般加了蛋白酶抑制剂 cocktail 的样品蛋白可以至少储存一个月，冻融三次；但时间长了或者冻融次数多了的话，蛋白还是会发生降解的，不同蛋白降解时间不一样的。
问三种磷酸酶抑制剂cocktail的区别
答成分功能均不一样，具体信息可在官网进行查询。用哪个需要根据老师的实验需求确定。C0002的抑制范围会相对C0003广泛一点，如果只想买一支又不确定哪个合适的话，推荐C0002。如果想要更全面的抑制，推荐C0004。
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比如您的给药剂量是 10 mg/kg ，每只动物体重 20 g ，给药体积 100 μL ， 
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