1,3-Diphenylisobenzofuran (DPBF) is a fluorescent probe. It possesses a highly specific reactivity towards singlet oxygen forming an endoperoxide which decomposes to give 1,2-dibenzoylbenzene. 1,3-Diphenylisobenzofuran can detect the generation of reactive oxygen species (ROS).

一、细胞荧光标记
a.溶液配制：
1.母液配置：用 DMSO 配制成 10 mM 的 DPBF 母液，分装后于 -20℃ 或 -80℃ 避光保存。
2.工作液配置：用预热好的无血清细胞培养基或 PBS 稀释母液，配制成 10-20μM 的 DPBF 工作液（根据实验需求选择合适的工作液浓度，现配现用）。
b.操作步骤：
1.细胞染色：
悬浮细胞：离心收集细胞，加入 PBS 洗涤两次，每次 5 分钟。
贴壁细胞：弃去培养基，加入胰蛋白酶消化细胞。离心弃去上清后，加入 PBS 洗涤两次，每次 5 分钟。如不做流式实验，贴壁细胞可不做消化处理。
2.加入 DPBF 工作液：加入 1mL DPBF 工作液，室温孵育 30 分钟。
3.离心洗涤：400g，4℃ 离心 3-4 分钟，弃去上清。加入 PBS 洗涤细胞两次，每次 5 分钟。
4.重悬检测：用 1mL 无血清培养基或PBS重悬细胞后，在荧光显微镜或流式细胞仪下检测。
二、超氧阴离子检测
a.操作步骤：
1.将纳米酶和 DPBF 溶解于 PBS 溶液中，配制成所需浓度。
2.反应体系构建：将配制好的纳米酶和 DPBF 溶液混合，置于适当的反应容器中，孵育 5min。
3.结果检测：通过紫外-可见分光光度计或荧光光谱仪等仪器，测定反应前后溶液的吸光度或荧光强度变化（激发波长 410 nm，发射波长 455 nm），以评估超氧阴离子的生成情况。