Hoechst 33258 analog 3 is part of a family of blue fluorescent dyes used to stain DNA.

Hoechst 33258 和 Hoechst 33342 是一种常用的染料，它们具有相似的激发/发射光谱。这两种染料都可以在大约 350 nm 的紫外光下激发，并在 461 nm 的发射峰值处发出蓝色/青色荧光。未结合的染料在 510-540 nm 范围内具有最大荧光发射。Hoechst 染料能溶于水和有机溶剂，如二甲基甲酰胺或二甲基亚砜，浓度可达 10 mg/mL。其水溶液在 2-6 °C 下避光可稳定存放至少六个月，长期存储时，溶液应在 ≤-20 °C 下冷冻。虽然这些染料能与所有核酸结合，但与富含 AT 的双链 DNA 结合能显著增强荧光。Hoechst 染料可穿透细胞膜，能在活细胞或固定细胞中与 DNA 结合。

使用方法
1. 溶解与稀释：
Hoechst 33258 Analog 3通常溶解在DMSO（如适用）或PBS中。使用前可按照制造商推荐的浓度稀释染料。
一般推荐的染色浓度在10ug/ml，具体浓度需根据实验要求进行优化。
2. 染色步骤：
a. 固定：如果需要对细胞进行固定（例如，用甲醛或冰冷的甲醇固定），首先进行固定。
b. 染色：将适量的Hoechst 33258 Analog 3溶液加入到细胞培养板中，染色约15-30分钟，温度为室温。
c. 冲洗：使用PBS或适当的缓冲液轻轻洗涤细胞，以去除未结合的染料。
3. 荧光显微镜观察：经过染色的细胞可以在紫外光下进行观察。
Hoechst 33258 Analog 3会发出蓝色荧光，通常在360-380 nm的激发光下，发射光在450-470 nm范围内。