Hoechst 33258 analog 2 is part of a family of blue fluorescent dyes used to stain DNA.

Hoechst 33258和Hoechst 33342是最常用的染料，它们具有相似的激发/发射光谱。这两种染料在大约350 nm的紫外光下被激发，并在大约461 nm的发射最大值附近发出蓝色/青色荧光。未结合的染料在510-540 nm范围内具有最大荧光发射。Hoechst染料可溶于水和有机溶剂，如二甲基甲酰胺或二甲基亚砜。浓度可达到10 mg/mL。水溶液在2-6 °C下避光保存至少六个月是稳定的。长期存储时，溶液被冻存在≤-20 °C。虽然这些染料可以结合到所有核酸上，但与富含AT的双链DNA结合时，荧光显著增强。Hoechst染料能够渗透细胞并在活细胞或固定细胞中与DNA结合。

一、溶液配制
1. 母液配置：Hoechst 33258 analog 2 将其溶解在 DMSO 或水中，制备浓度为 1-10 mM 的储存溶液。
2. 工作液配置：使用前用PBS/DMEM/H2O稀释至合适的浓度，常见的工作浓度为 1-10 μM，但具体浓度应根据实验需求进行优化。
二、细胞染色
1. 细胞培养：在适当的培养皿中培养细胞，确保细胞达到适当的密度（例如，70%-80% 的融合度）。
2. 染色：将 Hoechst 33258 analog 2 的工作浓度添加到细胞培养基中。常见的工作浓度为 1-10 µM，但具体浓度可根据实验需要进行调整。
3. 在室温或37°C下孵育细胞 10-30 分钟，具体时间可根据实验要求进行调整。
4. 洗涤细胞：染色后，用 PBS（磷酸盐缓冲盐水）洗涤细胞，去除未结合的染料，防止非特异性染色。
5. 荧光检测：Hoechst 33258 analog 2 在 紫外光（360 nm） 激发下发出蓝色荧光，发射波长为 460 nm。染料特异性地结合 DNA，可通过配有适当滤光片的 荧光显微镜 或 流式细胞仪 检测其荧光。
注意事项：
1. 光敏性：Hoechst 染料对光敏感，长期暴露于强光下可能会影响其荧光强度。因此，建议在低光环境中处理，并避免2. 在存储和操作过程中不必要的光照暴露。
3. 细胞毒性：在高浓度下，Hoechst 染料可能对细胞具有细胞毒性。因此，需要优化浓度以减少可能的细胞损伤。