使用方法
一、溶液配置
1.母液和工作液的配置：它可以溶解在 DMSO 中，并在实验中进一步稀释为水缓冲液溶液作为工作液来使用。
二、操作步骤

1. 样品准备
   目标分子：该探针主要用于检测 MIF 活性，或作为一般的荧光染料。它可以用于研究 MIF 在炎症、癌症和免疫反应中的作用。
   浓度：对于荧光实验，通常使用浓度为 1–10 μM 的溶液，具体浓度根据实验的灵敏度和要求进行调整。
2. 实验条件
   1） 缓冲液选择：为了研究 MIF 抑制，推荐选择适合的缓冲液（例如 pH 范围为 7.0–7.5 的磷酸盐缓冲液），以模拟生理条件。
   2）加入 3-Cyano-7-hydroxycoumarin：将适量的 3-Cyano-7-hydroxycoumarin 溶液（通常为 0.1–1 mM）加入到样品中。
   3）反应温度与时间：通常，反应温度为室温至 37°C。反应时间取决于样品中酶的活性，通常在 30 分钟到 1 小时之间。
   4） 过氧化氢（H₂O₂）通常作为氧化剂加入，启动反应。
   5）颜色变化：反应结束后，生成的产物通常会呈现棕色或深色，可以使用比色法（如 UV-Vis 分光光度计）进行定量检测。
3. 荧光成像
   3-Cyano-7-hydroxycoumarin 可用作荧光探针，在活细胞成像中跟踪分子相互作用或 MIF 等生物分子的活动。
   检测：通过荧光微孔板读数器、共聚焦显微镜或流式细胞仪量化荧光强度。
4. 抑制实验
   对于 MIF 互变异构酶抑制实验，可以使用 3-Cyano-7-hydroxycoumarin 来测定其 Ki 值为 2.9 μM 的抑制效能。
   方法：通过测量荧光猝灭效果来评估 3-Cyano-7-hydroxycoumarin 对 MIF 的抑制程度。
   储存条件
   1）3-Cyano-7-hydroxycoumarin 应储存于 -20°C 的干燥、阴凉处，避免光照和湿气。
   2）溶液应新鲜配制，如果需要存储，应在 -20°C 或更低温度下并避光保存。