Hoechst 33258 trihydrochloride (Bisbenzimide) is a benzimidazole anti-filarial agent. it is fluorescent when it binds to certain nucleotides in DNA, thus providing a tool for the study of DNA replication. it also interferes with mitosis.

HeLa cells:51.31±4.56 μM (IC50), U937 cells:15.42±2.16 μM (IC50), HL-60 cells:32.43±3.27 μM (IC50)

溶液配置
a.储备液的制备:取 10 mg 溶于 5 mL DMSO；（建议分装后于 -20 ℃ 或 -80 ℃ 避光保存）
b.Hoechst 工作液的制备
稀释储备液在无血清细胞培养基或 PBS 中溶解，得到终浓度为 10 μg/mL 的 Hoechst工作液；（根据实验需求选择合适的工作液浓度，现配现用）
c.细胞染色
1. 悬浮细胞 （6 孔板）
a．在 4℃ 下以 1000 g 离心 3-5 分钟，然后弃去上清液。PBS 洗涤 2 次，每次 5 分钟。细胞密度为 1×106/mL；
b．加入 1 mL 工作液，室温孵育 3-10 分钟；
c． 4℃、400 g 离心 3-4 分钟，弃上清；
d．用 PBS 洗涤 2 次，每次 5 分钟；
e．用无血清细胞培养基或 PBS 重悬细胞。荧光显微镜或流式细胞仪观察。
2. 贴壁细胞
a．在无菌盖玻片上培养贴壁细胞；
b.从培养基上取下盖玻片并吸出多余的培养基；
c.加入 100 μL 工作液，轻摇使之完全覆盖细胞，室温孵育 3-10 分钟；
d．用培养基洗涤 2 次，每次 5 分钟。荧光显微镜或流式细胞仪观察。