Hoechst 33258 Staining Solution

1. DNA标记特异性强，对DNA的亲和力显著高于RNA，RNA背景干扰小。
2. 细胞膜通透性好，无需破膜。
3. 细胞毒性低，可用于短期（数小时）活细胞追踪实验。
4. 兼容性好，可与多重荧光探针共染。
5. 操作简便，检测快速。

细胞核形态观察与计数、活细胞动态追踪、细胞凋亡检测、药物毒性评估、染色体核型鉴定、核定位信号研究。

用PBS将Hoechst 33258储备液稀释为0.5-10 μg/mL的Hoechst 33258染色工作液（避光操作）。具体浓度根据样本和实验需要进行调整。

1. 贴壁细胞染色
   （1）将细胞爬片从培养箱取出，用PBS洗涤3次，每次3 min。
   （2）加入4%多聚甲醛，室温固定10 min。PBS洗涤3次，每次3 min。
   （3）若需要免疫荧光染色，则先进行免疫荧光染色，再进行Hoechst 33258染色。若不需其它染色，则直接进行Hoechst 33258染色。
   （4）加入Hoechst 33258染色工作液，室温下避光孵育10-20 min。PBS洗涤3次，每次3 min。
   （5）在载玻片上滴加适量抗荧光猝灭液，将有细胞的那面爬片贴合抗荧光猝灭液并放置其上，在爬片周围滴加封片液以封片。
   （6）在荧光显微镜下观察并拍照记录。Ex=352 nm，Em=461 nm左右。
2. 悬浮细胞染色
   （1）以1000 rpm、4℃离心5 min收集悬浮细胞，弃上清。用PBS重悬并洗涤2次。
   （2）若需要免疫荧光染色，则先进行免疫荧光染色，再进行Hoechst 33258染色。若不需其它染色，则直接进行Hoechst 33258染色。
   （3）加入Hoechst 33258染色工作液，室温避光孵育15-30 min。1000 rpm、4℃离心5 min，弃上清，用PBS洗1次。
   （4）加入PBS重悬，用于流式细胞术检测或制成细胞涂片后在荧光显微镜下检测。Ex=352 nm，Em=461 nm左右。

-20℃避光保存，一年有效。

1. Hoechst 33258具备亲脂性，可通过细胞膜的脂质双分子层被动扩散进入活细胞，实验时无需额外的破膜处理。用Hoechst 33258对活细胞染色时，无需固定步骤。
2. 荧光染料都存在淬灭的问题，建议染色后尽量当天完成检测。
3. 本品仅适用于专业科研用途，严禁用于临床诊断、治疗、食品或药品领域，且不得存放于住宅等非专业场所。
4. 为保障操作安全与人员健康，操作时请务必穿戴实验服并佩戴一次性手套。