DDAO is a promising near-infrared (NIR) red fluorescent probe with long emission wavelength (λem = 656 nm) and tunable excitation wavelength (600-650 nm). It can de desiged for detection of the activities of different enzymes such as β-galactosidase, sulfatase, protein phosphatase 2A, carboxylesterase 2, human albumin and esterases.

使用方法
一、试剂准备：
1.储备液的配置：DDAO 溶解于适当的溶剂中（如 DMSO、乙醇或水），根据实验的具体需要准备储备溶液。
2.工作液的配置：储备溶液的浓度通常为1 mM（但可以根据实验调整浓度）。
二、操作步骤
1.酶活性检测：
样品准备： 需要准备待测样品（如细胞、组织或溶液）和相应的酶。例如，检测 β-半乳糖苷酶时，可以使用 β-半乳糖苷作为底物。
2.反应步骤：
1）将 DDAO 荧光探针溶液加入样品溶液中。
2）根据实验要求和酶活性，调节 pH 值（通常使用适当的缓冲溶液）。
3）在适当的温度下孵育样品一定时间，通常为10-60分钟，具体时间根据酶的种类和实验需求调整。
4）在此过程中，DDAO 将与目标酶发生反应，生成荧光信号。
3. 荧光检测：
1）使用荧光分光光度计或荧光显微镜进行检测，设置激发波长在600-650 nm，发射波长在656 nm。
2）根据荧光强度的变化，评估酶活性。
3）计算酶反应的速度或活性水平，通常需要对照组数据以进行比较。
3.数据分析：
1）根据测得的荧光强度变化，可以绘制标准曲线并通过比较样品和对照组的荧光值来评估酶的活性。
2）对于不同酶的活性，可能需要不同的底物和优化的实验条件。
注意事项：
1.溶解性： 确保 DDAO 能完全溶解在适当的溶剂中，并避免浓度过高，可能对细胞或酶的活性产生毒性影响。
2.光稳定性： DDAO 对光敏感，因此在储存和操作时应避免强光暴露，以防荧光漂白。
3.酶选择与优化： 不同酶可能需要不同的底物或反应条件，因此在使用时需要根据具体酶的性质进行优化。