CY5-N3 (Sulfo-Cyanine5-azide) is an anthocyanin fluorescent dye containing azide groups. CY5-N3 is used for cell imaging, tissue imaging, and in vivo imaging.

使用方法
一、 溶液制备
1. 储备液：将 CY5-N3 溶解于 DMSO、DMF 或适当的缓冲液中。常用储备液浓度：1–10 mM。储存于 -20°C 避光保存，以防止光降解和降解。
2. 工作溶液：将储备液稀释至所需浓度（例如 0.1–10 µM），并使用适当的缓冲液（如 PBS 或 HEPES 缓冲液，pH 7.2–7.4）稀释。新鲜配制，确保最佳效果。
二、 生物正交标记使用 CY5-N3
1. SPAAC 标记协议（无铜点击化学）：准备功能化的靶生物分子（如 DBCO 修饰的蛋白质、肽或核酸）。将 CY5-N3 以所需浓度（如 1–10 µM）与目标分子混合，并在反应缓冲液（如 PBS，pH 7.4）中孵育。通常在 室温 下孵育 30 分钟到 2 小时。
2. CuAAC 标记协议（铜催化点击化学）：
1）向反应体系中加入少量铜（如 CuSO₄ 和还原剂如抗坏血酸）。
2）将 CY5-N3 与具有炔烃基团的生物分子混合，放入反应缓冲液（如 PBS 或 Tris-HCl，pH 7.4）中。
3）在 室温 下孵育 30–60 分钟，并适当搅拌。
4）使用分子筛层析、超滤或类似方法纯化标记的生物分子，去除未反应的染料。
3. 成像应用
细胞成像：
(1) 通过使用 CY5-N3 标记的生物分子或直接在 SPAAC/CuAAC 标记中对活细胞或固定细胞进行标记。
(2) 使用 PBS 洗涤细胞，去除未结合的染料。
(3) 使用共聚焦显微镜或荧光显微镜分析荧光信号，选择适合 CY5 的滤光片组（激发波长：约 646 nm，发射波长：约 662 nm）。
组织成像：
(1) 使用 CY5-N3 标记的探针对组织切片进行染色。
(2) 彻底洗涤切片以去除背景荧光。
(3) 使用荧光显微镜或全片成像系统进行分析。
体内成像：
(1) 将 CY5-N3 标记的探针注入动物模型。
(2) 使用体内成像系统（如 IVIS）或类似平台进行近红外荧光成像。
(3) 监测标记探针的分布、靶向和清除过程。
注意事项
1.光敏性：CY5-N3 对光敏感，避免长期暴露在光照下，并避光保存。
2.反应优化：优化染料浓度、反应时间和缓冲液条件，以实现高效标记和减少背景。
3.铜毒性（对于 CuAAC）：铜离子可能影响生物样本，因此应仔细控制铜浓度，或在铜毒性问题上选择 SPAAC。
4.稳定性：储备液应分装以避免反复冻融，保持溶液活性。