Thioflavin T (Basic Yellow 1) is a widely used dye for visualizing and is a cationic Benzothiazole dye that shows enhanced fluorescence upon binding to amyloid in tissue sections.

Thioflavin T (ThT) 是一种苯并噻唑染料。绑定于淀粉样纤维时，Thioflavin T (ThT) 的荧光增强，因而常用于诊断淀粉样纤维，适用于体外和体内实验。Thioflavin T 的荧光激发和发射变化还依赖于胶束的形成。利用原子力显微镜直接观察到直径为3 nm的Thioflavin T胶束，并沿着代表性纤维的长度观察到结合的Thioflavin T胶束。Thioflavin T胶束与淀粉样纤维结合，导致荧光发射增强[1]。在水溶液中，Thioflavin T以常用于通过荧光测定法监测纤维的浓度（约10-20 μM）形成胶束。通过测量不同浓度的Thioflavin T的特定电导率变化，计算出关键胶束浓度为4.0±0.5 μM。Thioflavin T浓度超过关键胶束浓度时，沿淀粉样纤维长度结合的胶束数量增多。在低pH条件下，如原子力显微镜所观察到的，Thioflavin T胶束受到破坏，以及绑定至淀粉样纤维的Thioflavin T的荧光增强在pH降至3以下时减少数倍。

使用方法
一、 溶液制备
1.储备液：将Thioflavin T溶解于去离子水或适当的缓冲溶液中，通常制备为1–10 mM的储备液。根据需要，也可以使用PBS（pH 7.4）作为溶剂。在水溶液中，发现硫黄素 T 以胶束形式存在，其浓度通常用于通过荧光测定法监测原纤维 (~10 -20 μM)。
2.工作液：根据实验需求，将储备液稀释至合适的工作浓度，通常为10–50 µM，用于组织切片或细胞染色。
二、 应用步骤
组织切片染色：
1. 将组织切片固定并脱蜡后，使用Thioflavin T工作液处理切片。
2. 将切片浸泡在Thioflavin T溶液中，通常染色10-30分钟。
3. 用PBS或蒸馏水冲洗切片，去除多余染料。
4. 观察样本荧光，使用适当的激发波长（通常为450–480 nm），荧光发射波长为520–550 nm。
5. 细胞染色：
1）将细胞培养在适当的培养基中，并进行固定处理。
2）使用10–50 µM的Thioflavin T工作液染色细胞，通常染色10–30分钟。
3）用PBS冲洗细胞，去除多余染料。
4）使用荧光显微镜观察细胞中的淀粉样蛋白聚集物，通常在青光下激发。
5. 校准与对照
1）对照组：设置未添加Thioflavin T的样本作为对照，确保染色的特异性。
2）标准曲线：通过已知浓度的淀粉样蛋白样品建立荧光强度与蛋白浓度之间的标准曲线。
注意事项
1）光敏性：Thioflavin T为光敏性染料，实验中应避免强光照射，以防荧光信号衰减。
2）储存条件：Thioflavin T应储存于避光、干燥处，通常储存于-20°C。
3）溶解性：Thioflavin T通常能在水或PBS中良好溶解，但要避免溶液中残留不溶物。