• 造模机制：

  Polyinosinic-polycytidylic acid,Poly (I:C)联合中等潮气量机械通气（MTV）通过 “双打击” 机制诱导 ARDS：① 初始打击（Poly (I:C)）：启动肺组织 TLR3 信号通路，引发轻度肺损伤，上调炎症因子表达；② 二次打击（MTV）：通过肠-肺轴增加肠道通透性，导致内毒素（LPS）入血，启动非经典炎症小体（caspase-11）与经典炎症小体（NLRP3/caspase-1）， cleavage Gasdermin D（GSDMD）引发肺泡巨噬细胞焦亡；③ 最终导致肺泡-毛细血管屏障破裂、炎症因子（IL-1β、IL-6、HMGB1）大量释放，模拟临床病毒感染继发机械通气相关 ARDS 的核心病理进程。

• 相关产品：

  Polyinosinic-polycytidylic acid (T23171)

• 造模方法：

  实验对象：

  小鼠, C57 BL/6, 雄性, 8-10 周龄, 体重 20-25g

  给药剂量和方式：

  ① 核心造模（双打击方案）：
  - 第一次打击：气管内注射（i.t.）, Poly (I:C), 3 mg/kg, 无菌无内毒素水溶解, 体积 100 μL；
  - 第二次打击：第一次打击后 6 小时，连接啮齿动物呼吸机, 中等潮气量通气（MTV）, 潮气量 10 mL/kg，呼吸频率 140 次 / 分，PEEP 0 cm H₂O，FiO₂ 0.21, 持续通气 4 小时；
  ② 单因素对照造模（可选）：
  - 仅 Poly (I:C) 组：气管内注射 3 mg/kg Poly (I:C)，自发呼吸 10 小时；
  - 仅 MTV 组：气管内注射 100 μL 无内毒素水，6 小时后通气 4 小时；
  ③ 空白对照：气管内注射 100 μL 无内毒素水，自发呼吸 10 小时；
  ④ 干预验证组（可选）：
  - 炎症小体抑制剂（如 MCC950）、GSDMD 抑制剂按体重调整剂量，造模前 1 小时腹腔注射；
  - RAGE 拮抗剂：造模同时给药，阻断肠-肺轴信号；

  给药频率和周期：

  第一次打击单次给药，
  第二次打击于第一次打击后 6 小时启动，持续 4 小时

• 模型验证：

  1. 病理指标： - 肺组织损伤：HE 染色显示肺泡水肿、充血、中性粒细胞浸润、肺泡内出血，病理评分达 12 分以上（对照组 < 3 分，p<0.001）； - 屏障功能：伊文思蓝白蛋白（EBA）通透性显著升高（较对照组增加 60% 以上，p<0.01），支气管肺泡灌洗液（BALF）总蛋白浓度达 600 μg/mL 以上（p<0.001）； 2. 分子指标： - 焦亡相关：肺组织 / 肺泡巨噬细胞中 cleaved caspase-11、cleaved caspase-1、cleaved GSDMD 蛋白表达显著上调（Western blot 检测）； - 炎症因子：BALF 中 IL-1β、IL-6、HMGB1 水平分别达 400 pg/mL、800 pg/mL、150 pg/mL 以上，血浆 IL-18 达 200 pg/mL 以上（p<0.001）； - 肠 - 肺轴：血清 FITC - 葡聚糖（4 kD）浓度达 1000 μg/mL 以上（肠道通透性增加），血清及 BALF 内毒素（LPS）水平升高 3 倍以上（p<0.01）； 3. 细胞指标： - BALF 总细胞数显著增加，中性粒细胞占比达 78%（p<0.001）； - 肺泡巨噬细胞焦亡率达 15% 以上（caspase-1 与 TUNEL 双阳性染色，p<0.001）。

*注意事项：通气结束后立即处死，避免延迟导致炎症因子降解

*参考文献：Jin S,et,al. Mechanical Ventilation Exacerbates Poly (I:C) Induced Acute Lung Injury: Central Role for Caspase-11 and Gut-Lung Axis. Front Immunol. 2021 Jul 19;12:693874.