Acridine Orange hydrochloride is a fluorescent dye of cell-permeable. It binds to nucleic acids, resulting in an altered spectral emission.It is used as a supravital stain and in fluorescence cytochemistry. It may cause mutations in microorganisms.

使用方法
一、溶液制备
1.储备液：Acridine Orange hydrochloride 可溶于水、PBS 或适当的缓冲液中，常用储备液浓度为 0.1-1 mg/mL。储存于 4°C 避光保存，以防止降解。
2.工作溶液：将储备液稀释至所需浓度，通常使用的浓度范围是 0.1–10 µg/mL，具体浓度依照实验要求进行调整。新鲜配制工作溶液，以确保最佳效果。
二、 核酸染色方法操作步骤
1.细胞染色：
1）将细胞培养液中的细胞沉淀或组织切片浸泡在 Acridine Orange 工作溶液中，染色时间一般为 5–30分钟，具体时间可根据样本的不同进行优化。
2）若是悬浮细胞，可以直接加入 Acridine Orange 溶液，并在室温下孵育。
3）若是固定细胞或组织切片，则需先进行适当的固定过程（如甲醛固定）。
2.染色后的清洗：使用 PBS 或适当的缓冲液洗涤细胞或切片，去除未结合的染料。
3.荧光显微镜观察：使用荧光显微镜观察，激发波长通常为 460–490 nm，发射波长为 515–530 nm（绿色荧光）以及 590–620 nm（红色荧光）。
注意事项：Acridine Orange 在与 DNA 结合时发射 红色 荧光，而与 RNA 结合时则发射 绿色 荧光，能够区分这两种核酸。
4. 细胞凋亡和细胞周期检测
1） 凋亡检测：Acridine Orange 可用于检测细胞凋亡，在早期凋亡细胞中，DNA 染色呈现绿色荧光，而在晚期凋亡或坏死细胞中，DNA 则呈现红色荧光。
2）细胞周期分析：使用 Acridine Orange 染色细胞后，通过流式细胞仪分析荧光强度，可以获得关于细胞周期阶段（G0/G1, S, G2/M）的信息。
注意事项
1.光敏性：Acridine Orange 对光敏感，应避免染液暴露于强光下，并在避光环境中储存。
2.毒性：Acridine Orange 在高浓度下可能具有毒性，特别是在细胞培养或微生物实验中应小心使用。根据实验需要合理控制使用浓度。
3. 污染问题：Acridine Orange 可能会引发微生物突变，因此在微生物学实验中，需遵循相应的实验安全规定。
4.染色时间：染色时间过长可能导致背景信号增大，影响实验结果，因此需要控制染色时间。