Propidium Iodide (PI) is a red fluorescent dye that can be used for cell staining for fluorescence microscopy, confocal microscopy, flow cytometry, and fluorometer analysis. In aqueous solution, the Ex/Em of Propidium Iodide is 493/636 nm; upon binding to nucleic acids, the Ex/Em of PI-nucleic acid becomes 535/617 nm and the fluorescence signal is enhanced by 20-30 times.

HEK293 cells:1.1 μM

Propidium Iodide 吸收和 Flow cytometry 检测细胞死亡实验
1. 将 PI 原液 (0.5 mg/mL in PBS) 置于 4℃ 黑暗处保存。使用前，立即配制 PI-FACS 缓冲液，每 1 mL PBS 加入 20 µL PI 原液。
2. 收集悬浮细胞：将细胞直接收集在离心管中，500g 离心 5 min 收获所有细胞。
3. 收集贴壁细胞：去除并保存含有死亡细胞和有丝分裂细胞的培养基。使用标准的组织培养技术分离活细胞，如用胰蛋白酶-EDTA 孵育，并确保收集任何洗液 (如 PBS)。将培养基中的细胞和来自任何洗涤液的细胞入到分离的细胞中，500g 离心 5 min 收获所有细胞。
4. 将收获的细胞重新悬浮在 PI-FACS 缓冲液中。将细胞在室温下黑暗中孵育 15 min。
5. 用流式细胞仪测定细胞死亡率。