Luminol (Diogenes reagent)(Diogenes reagent) is a versatile chemical, exhibits chemiluminescence, with a striking blue glow, when mixed with an appropriate oxidizing agent.

使用方法
一、溶液配置
1.储备液：溶解 Luminol 于碱性溶液（如 0.1 M NaOH 或 50 mM Tris-HCl，pH 8.5–9.0），浓度通常为 10–50 mM。
注意事项：粉末应避光保存于 -20°C 的干燥环境中；储备液短期可存放于 4°C，长期建议避光分装后储存在 -20°C，避免反复冻融。
2.工作液：将储备液稀释至 0.1–1 mM 的终浓度。（请根据实验需求调整工作液浓度）
二、操作步骤
1.化学发光反应
Luminol 在过氧化物（如 H₂O₂）的存在下，通过过氧化物酶（如 HRP）或催化剂（如铁离子）激发生成光。
1）反应体系：
2）添加过氧化物（如 0.1–10 mM H₂O₂）及酶（如 1–10 µg/mL HRP）作为激发剂。
3）检测方法：通过化学发光检测仪（如微孔板发光读数仪）测量光信号。
注意事项：
1.Luminol 对光和氧气敏感，操作时应尽量避光，避免暴露于空气中。
2.配制工作液后应尽快使用，以减少降解和信号衰减。
3.鲁米诺浓度是影响化学发光 (CL) 强度的重要因素。鲁米诺化学发光 (LCL) 的强度不仅仅取决于鲁米诺的浓度，还取决于其他因素，如氧化剂、酶和 pH 的浓度。最大记录的 CL 强度是在鲁米诺浓度为 0.3 mM 时。在 0.01 至 0.3 mM 的范围内，随着鲁米诺浓度的增加，CL 强度呈线性增加。然而，进一步增加鲁米诺浓度会导致发光强度降低。