Fluorescamine (Ro 20-7234) ( Ro 20-7234) is not fluorescent itself but reacts with primary amines to form highly fluorescent products. It is used to detect amines and peptides.

一、胺类和肽的检测
1.材料准备
1）Fluorescamine 溶液： 配制为 0.1–1 mg/mL 的溶液，通常溶解在无水 DMSO 或 DMF 中。
氨基酸、肽或蛋白质样品溶液。
2）缓冲液： 常用 Tris-HCl 或 PBS 缓冲液，pH 7–8。
3）荧光检测设备： 如荧光分光光度计，激发波长 390–400 nm，发射波长 475–480 nm。
2.步骤
1） 溶液制备：将 Fluorescamine 溶解于无水 DMSO 或 DMF 中，浓度通常为 0.1–1 mg/mL。
2）反应体系配置：向样品溶液中加入 Fluorescamine 溶液，通常按 1:1 的比例加入（样品体积: Fluorescamine 溶液）。
3）使用缓冲液将最终反应体系稀释至适当浓度。
3.反应和孵育：混合均匀后，室温下孵育 5–15 分钟，使 Fluorescamine 与游离胺基反应形成荧光化合物。
避免强光照射，以防止荧光信号衰减。
4.荧光检测：使用荧光分光光度计，激发波长约 390–400 nm，发射波长 475–480 nm，检测荧光强度。
根据标准曲线计算样品中的氨基酸、肽或蛋白质浓度。
二、蛋白质定量分析
1. 材料准备
1）Fluorescamine 溶液（0.1–1 mg/mL）。
2）蛋白质样品溶液。
3）缓冲液（如 PBS 或 Tris-HCl）。
2. 步骤
1） 溶液准备与反应体系配置：：按上述方法配置 Fluorescamine 溶液。
2）将 Fluorescamine 溶液加入蛋白质样品中，确保反应液体积比为 1:1。
3.孵育：在室温下孵育 5–10 分钟，以保证氨基与 Fluorescamine 完全反应。
4.荧光测量：在荧光分光光度计中测量激发波长 390–400 nm，发射波长 475–480 nm 的荧光信号。
使用标准曲线计算蛋白质中的氨基浓度。
注意事项
1）操作安全：Fluorescamine 溶液对光敏感，操作时尽量避光，并戴好手套和护目镜。
2）溶剂选择：Fluorescamine 溶解在无水 DMSO 或 DMF 中。使用时应确保试剂的纯度，避免溶剂的杂质影响反应。
3）储存：Fluorescamine 溶液应避光储存，推荐在-20°C 下长期保存。