使用方法
一、溶液配置
1.母液配置： ABTS diammonium salt 溶于水，通常使用蒸馏水或去离子水溶解。浓度一般为 1–10 mM，具体浓度取决于实验需求。
二、操作步骤
1.样品准备： 需要检测的酶底物一般为含有辣根过氧化物酶（HRP）的溶液。ABTS 可与 HRP 催化的过氧化氢反应生成有色产物。
2.反应条件：
反应缓冲液： 推荐使用 pH 3.5 至 4.5 范围内的缓冲液（如柠檬酸缓冲液）。
反应温度： 通常在室温下进行反应，反应时间为 10-30 分钟。
催化剂： 在 ABTS 溶液中加入过氧化氢（H₂O₂）作为氧化剂，HRP 催化反应生成有色产物。
3. 产物检测： 生成的产物（通常为绿色）可以通过 UV-Vis 分光光度计在 414 nm 波长下测量吸光度，来定量分析 HRP 的活性。
4.产物分离与纯化： 如果需要，可以通过色谱方法进一步纯化生成的产物，尤其是当 ABTS 反应用于生物分析时。
5.为了纯化和表征，在培养上清液中产生活性蛋白的条件下，大规模 (XL) 培养过氧化物酶阳性转化体。培养 160 小时后，相对于底物 ABTS 的活性达到 55,000 U/L，收集含有过氧化物酶的上清液。以ABTS为底物，当 H2O2 浓度升至 0.125 mM 以上时，过氧化物酶活性显著下降，表明该酶被 H2O2 抑制。根据所测底物的不同，最大反应速率可达 31.2 至 125 μM。