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常见问题解答
Protein G Immunomagnetic Beads
产品编号 C0116B
TargetMol 的 Protein G 免疫沉淀磁珠采用生物纳米表面技术，将 Protein G 高密度定向包被到超顺磁性微球表面，可以用于蛋白质、蛋白质复合物、蛋白质核酸复合物和其他抗原的免疫沉淀（IP）。重组 Protein G 蛋白更适合于结合mouse IgG1, IgG2a, IgG2b, IgG3, rat IgG1, IgG2a, IgG2b, IgG2c, rabbit and goat polyclonal Abs, 以及 human IgG1, IgG2, IgG3 和 IgG4。本品适用于细胞裂解物、细胞分泌上清、血清、腹水等样品中抗原的免疫沉淀反应。
本产品规格为溶液总体积。
本产品规格为溶液总体积。
| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
|---|---|---|---|
| 1 mL | ¥ 380 | 5日内发货 | |
| 1 mL * 5 | ¥ 1,620 | 5日内发货 |
大包装 & 定制
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TargetMol 的所有产品仅用作科学研究或药证申报，不能被用于人体，我们不向个人提供产品和服务。请您遵守承诺用途，不得违反法律法规规定用于任何其他用途。
产品信息
| Protein G 免疫沉淀磁珠 | 特性 |
|---|---|
| 基质 | 硅基磁珠 |
| 粒径 | 200 nm |
| Human IgG 能力（Antibody Capacity） | ≥0.85 mg hIgG/mL 磁珠 |
| 磁珠浓度 | 10 mg/mL |
| 应用推荐 | IP, Co-IP, ChIP, RIP |
产品特点
- 非特异性吸附低
- 高效率、高产量、低消耗
- 操作灵活、简便
- 实验结果可靠、重复性高
自备试剂
| 试剂 | 可选配方 |
|---|---|
| 洗涤缓冲液 Washing Buffer (1×) | TBST: 50 mM Tris-HCl，150 mM NaCl, 0.1%(v/v) Tween-20，pH7.4 |
| 酸性洗脱缓冲液 Acidity Elution Buffer | 0.1 M Glycine，0.1% (v/v) Tween-20，pH2.5 |
| 中和缓冲液 Neutralization Buffer | 1 M Tris-HCl, pH 9.0 |
操作说明
1. 抗原样品制备
选择合适的裂解液处理细胞样品，按照标准步骤制备细胞裂解液，置于冰上备用，或于-20℃长期保存。
2. 免疫复合物的制备
样品用量和孵育时间取决于具体的抗体-抗原体系，因此可能需要优化以实现最大产量。本实验方案适用于2∽10 µg亲和纯化抗体的反应规模，可根据需要按比例放大。
1)在离心管中，将每个样品的细胞裂解液与2∽10 µg免疫沉淀抗体混合。建议每个免疫沉淀反应的总蛋白量为500∽1500 µg。
2)用Washing Buffer将抗体和样品混合物稀释至300∽500 µL。
3)使用翻转混合仪或手工轻轻翻转离心管混合，在室温下孵育1∽2 h，或在4℃孵育2∽4 h，形成抗原/抗体混合物。
3. 磁珠预处理
1)将免疫沉淀磁珠用漩涡振荡器振荡1 min，使磁珠重新悬浮，取25~50 µL磁珠悬液放入1.5 mL EP管中。
2)向EP中加入500 μL Washing Buffer进行洗涤，温和翻转EP管数次，使磁珠重新悬浮。将EP管放入磁性分离器，静置1 min，进行磁性分离，吸去上清液，取下EP管。重复上述洗涤步骤2次。
4. 抗原沉淀反应
1)将步骤2中制备的抗原/抗体混合物加入到装有磁珠的离心管中，轻轻混匀。
2)使用翻转混合仪或手工轻轻翻转离心管混合，在室温下孵育1∽2 h，或在4℃孵育2∽4 h。然后进行磁性分离，收集上清液，置于冰上备用以供后续检测。
3)向离心管中加入1000 µL Washing Buffer进行洗涤，用移液器轻轻吹打，使磁珠-抗体-抗原复合物均匀分散，然后进行磁性分离，吸去上清液，取下EP管。重复洗涤两次。
5. 抗原洗脱
提供以下两种抗原洗脱方案，用户可根据后续检测的需要选择不同的洗脱方法。
1)变性洗脱法：此方法洗脱的样品适用于SDS-PAGE检测。向EP管中加入25 µL 1× SDS-PAGE Loading Buffer（自备），混合均匀，95℃加热5 min。然后进行磁性分离或者离心（室温，13000 g, 10 min），收集上清液，进行SDS-PAGE检测。
2)酸性洗脱法：向EP管中加入100 μL Acidity Elution Buffer，置于旋转混合仪上在37℃孵育5-10 min。然后进行磁性分离或者离心，收集上清液。如需中和酸性洗脱液，可向100 μL洗脱液中加入50 μL Neutralization Buffer，调整pH至中性。
保存条件
4℃，2年。
注意事项
- 避免冷冻磁珠。磁珠应保存在储存溶液中，防止干燥。
- 为了减少磁珠的损失，每次磁性分离的时间不应少于1 min。
- 在从磁珠保存管中取出磁珠之前，应充分震荡以确保均匀悬浮。操作过程中注意避免产生气泡。
- 建议使用质量较好的移液器吸头和反应管，以避免因磁珠和溶液附着而造成损失。
- 为确保最佳实验效果，请选择特异性较强的抗体进行免疫沉淀反应。
- 操作者可根据实际需求，利用抗体结合反应步骤和抗原结合反应步骤中收集的上清液，检测抗体、抗原与磁珠的结合情况。
- 在IP实验中，不同类型的抗体和抗原结合的亲和力会有所不同。因此，如果使用本试剂盒提供的缓冲体系未能获得理想的实验结果，操作者可以自行筛选和配制缓冲液进行实验。
- 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
- 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
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