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Protein G Immunomagnetic Beads

Name: Protein G Immunomagnetic Beads
Brand: TargetMol
SKU: C0116B
Rating: 5 (4 reviews)

产品编号 C0116B Protein G Immunomagnetic Beads

TargetMol 的 Protein G 免疫沉淀磁珠采用生物纳米表面技术，将 Protein G 高密度定向包被到超顺磁性微球表面，可以用于蛋白质、蛋白质复合物、蛋白质核酸复合物和其他抗原的免疫沉淀（IP）。重组 Protein G 蛋白更适合于结合mouse IgG1, IgG2a, IgG2b, IgG3, rat IgG1, IgG2a, IgG2b, IgG2c, rabbit and goat polyclonal Abs, 以及 human IgG1, IgG2, IgG3 和 IgG4。本品适用于细胞裂解物、细胞分泌上清、血清、腹水等样品中抗原的免疫沉淀反应。
本产品规格为溶液总体积。

规格	价格	库存	数量
1 mL	¥ 380	5日内发货
1 mL * 5	¥ 1,620	5日内发货

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TargetMol 的所有产品仅用作科学研究或药证申报，不能被用于人体，我们不向个人提供产品和服务。请您遵守承诺用途，不得违反法律法规规定用于任何其他用途。

实验操作小课堂

Protein G Immunomagnetic Beads产品问题解答

问用磁珠免疫沉淀后，检测有多条非特异条带？

答有非特异性的蛋白结合在磁珠上。建议：在Washing Buffer中加入50-350mM NaCl。加大洗脱力度和次数。

问用磁珠免疫沉淀后获得的蛋白量低？

答a. 蛋白质被降解。建议：加入蛋白酶抑制剂。 b. 所使用的磁珠量不够。建议：提高捕获免疫复合物所使用的磁珠量。 c. 样品中的目标蛋白量不够。建议：提高抗原样品量。

问在免疫共沉淀（IP）实验中，目标蛋白分子量发生变化的原因？

答复合物形成：目标蛋白可能与其他蛋白结合，形成复合物，从而改变其分子量。蛋白降解：目标蛋白可能被酶降解，导致分子量变化。蛋白修饰：目标蛋白在免疫共沉淀前后可能发生了修饰，如磷酸化或乙酰化，影响分子量。解决方案：若目标蛋白在免疫共沉淀前后分子量发生变化，可以进行验证实验，如Western blot或质谱分析。此外，在实验前可对样品进行处理，如使用蛋白酶抑制剂，避免过度处理样品，尽量减少目标蛋白的降解和修饰。

问免疫沉淀试剂盒中的Elution Buffer是什么成分？后续可以做质谱吗？

答Elution Buffer含有甘氨酸，呈酸性条件。洗脱产物可以进行质谱分析。可以在洗脱时加入NaOH进行中和，强酸或强碱会导致产物变性。

问如何避免磁珠在储存或使用过程中可能出现的聚集情况？

答磁珠应保存在2～8℃，使用时应避免由于污染而导致的不可逆聚集，或因干燥而导致的聚集。磁珠在低pH的洗脱缓冲液中发生聚集属于正常现象，不影响磁珠的正常使用。在缓冲液中添加终浓度为0.1% (v/v)的非离子型去垢剂（如NP-40、Tween-20或Triton X-100）可有效防止磁珠聚集。经过低pH洗脱操作的磁珠可以用Washing Buffer洗涤至中性，然后用含有0.1% (v/v) Tween-20的Tris buffer（pH7.5）振荡重悬磁珠，并用超声波水浴处理2 min，即可使磁珠恢复均匀状态，以上处理均不影响磁珠的抗体结合效率。注：超声处理也会使磁珠在样品溶液中捕获的抗体脱落，所以磁珠在加样后洗脱前不宜使用该方法。

常见问题解答

问三款 RIPA 裂解液有什么区别？

答RIPA 裂解液(强)、RIPA 裂解液(中)、RIPA 裂解液(弱)的有效裂解成分、裂解强度不同，建议查询官网，有三款RIPA裂解液的比较表。

问Cocktail 系列的使用方法？

答在室温下解冻，开盖前请低速离心一下，以便将黏附于管壁的液体甩至管底。然后在实验前以 1:100（v/v）稀释至溶液样品（细胞裂解液或组织提取液）。

问使用 CCK8 进行实验后，发现读值低，不变色、没差异等，应该怎么办？

答CCK8 在孵育 1-4 小时后，OD 读值在 1-2 之间为佳，线性关系比较好。关于 CCK8 的使用问题，通常建议调整细胞状态、增加种板数量、改变加药浓度、延长孵育时间等。

问蛋白酶抑制剂 cocktail C0001 使用时加到蛋白液中的有效抑制时间有多久？

答这个我们暂时没有准确的数据，因为它对不同样品不同蛋白的保护程度是不一样的。一般单次提取以后，不加蛋白酶抑制剂 cocktail 的样品蛋白会在 24 h 后发生明显降解，加了蛋白酶抑制剂 cocktail 的样品蛋白可以维持 48 h 不降解。如果提取后置于 -20℃ 储存的话，一般加了蛋白酶抑制剂 cocktail 的样品蛋白可以至少储存一个月，冻融三次；但时间长了或者冻融次数多了的话，蛋白还是会发生降解的，不同蛋白降解时间不一样的。

问三种磷酸酶抑制剂cocktail的区别

答成分功能均不一样，具体信息可在官网进行查询。用哪个需要根据老师的实验需求确定。C0002的抑制范围会相对C0003广泛一点，如果只想买一支又不确定哪个合适的话，推荐C0002。如果想要更全面的抑制，推荐C0004。

产品信息

Protein G 免疫沉淀磁珠	特性
基质	硅基磁珠
粒径	200 nm
Human IgG 能力（Antibody Capacity）	≥0.85 mg hIgG/mL 磁珠
磁珠浓度	10 mg/mL
应用推荐	IP, Co-IP, ChIP, RIP

产品特点

非特异性吸附低
高效率、高产量、低消耗
操作灵活、简便
实验结果可靠、重复性高

自备试剂

试剂	可选配方
洗涤缓冲液 Washing Buffer (1×)	TBST: 50 mM Tris-HCl，150 mM NaCl, 0.1%(v/v) Tween-20，pH7.4
酸性洗脱缓冲液 Acidity Elution Buffer	0.1 M Glycine，0.1% (v/v) Tween-20，pH2.5
中和缓冲液 Neutralization Buffer	1 M Tris-HCl, pH 9.0

操作说明

1. 抗原样品制备
选择合适的裂解液处理细胞样品，按照标准步骤制备细胞裂解液，置于冰上备用，或于-20℃长期保存。

2. 免疫复合物的制备
样品用量和孵育时间取决于具体的抗体-抗原体系，因此可能需要优化以实现最大产量。本实验方案适用于2∽10 µg亲和纯化抗体的反应规模，可根据需要按比例放大。
1)在离心管中，将每个样品的细胞裂解液与2∽10 µg免疫沉淀抗体混合。建议每个免疫沉淀反应的总蛋白量为500∽1500 µg。
2)用Washing Buffer将抗体和样品混合物稀释至300∽500 µL。
3)使用翻转混合仪或手工轻轻翻转离心管混合，在室温下孵育1∽2 h，或在4℃孵育2∽4 h，形成抗原/抗体混合物。

3. 磁珠预处理
1)将免疫沉淀磁珠用漩涡振荡器振荡1 min，使磁珠重新悬浮，取25~50 µL磁珠悬液放入1.5 mL EP管中。
2)向EP中加入500 μL Washing Buffer进行洗涤，温和翻转EP管数次，使磁珠重新悬浮。将EP管放入磁性分离器，静置1 min，进行磁性分离，吸去上清液，取下EP管。重复上述洗涤步骤2次。

4. 抗原沉淀反应
1)将步骤2中制备的抗原/抗体混合物加入到装有磁珠的离心管中，轻轻混匀。
2)使用翻转混合仪或手工轻轻翻转离心管混合，在室温下孵育1∽2 h，或在4℃孵育2∽4 h。然后进行磁性分离，收集上清液，置于冰上备用以供后续检测。
3)向离心管中加入1000 µL Washing Buffer进行洗涤，用移液器轻轻吹打，使磁珠-抗体-抗原复合物均匀分散，然后进行磁性分离，吸去上清液，取下EP管。重复洗涤两次。

5. 抗原洗脱
提供以下两种抗原洗脱方案，用户可根据后续检测的需要选择不同的洗脱方法。
1)变性洗脱法：此方法洗脱的样品适用于SDS-PAGE检测。向EP管中加入25 µL 1× SDS-PAGE Loading Buffer（自备），混合均匀，95℃加热5 min。然后进行磁性分离或者离心（室温，13000 g, 10 min），收集上清液，进行SDS-PAGE检测。
2)酸性洗脱法：向EP管中加入100 μL Acidity Elution Buffer，置于旋转混合仪上在37℃孵育5-10 min。然后进行磁性分离或者离心，收集上清液。如需中和酸性洗脱液，可向100 μL洗脱液中加入50 μL Neutralization Buffer，调整pH至中性。

保存条件

4℃，2年。

注意事项

避免冷冻磁珠。磁珠应保存在储存溶液中，防止干燥。
为了减少磁珠的损失，每次磁性分离的时间不应少于1 min。
在从磁珠保存管中取出磁珠之前，应充分震荡以确保均匀悬浮。操作过程中注意避免产生气泡。
建议使用质量较好的移液器吸头和反应管，以避免因磁珠和溶液附着而造成损失。
为确保最佳实验效果，请选择特异性较强的抗体进行免疫沉淀反应。
操作者可根据实际需求，利用抗体结合反应步骤和抗原结合反应步骤中收集的上清液，检测抗体、抗原与磁珠的结合情况。
在IP实验中，不同类型的抗体和抗原结合的亲和力会有所不同。因此，如果使用本试剂盒提供的缓冲体系未能获得理想的实验结果，操作者可以自行筛选和配制缓冲液进行实验。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

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C0116B-Protein G 免疫沉淀磁珠说明书-中文(0.97 MB)