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Protein G Agarose

Protein G Agarose

产品编号 C0130Protein G Agarose
TargetMol 的 Protein G 琼脂糖凝胶将 Protein G 高密度定向偶联到高度交联的琼脂糖凝胶微球表面。重组 Protein G 蛋白更适合于结合 mouse IgG1, IgG2a, IgG2b, IgG3, rat IgG1, IgG2a, IgG2b, IgG2c, rabbit and goat polyclonal Abs, 以及 human IgG1, IgG2, IgG3 和 IgG4。
TargetMol 的 Protein G 琼脂糖凝胶适用于从细胞裂解物、细胞分泌上清、血清、腹水等样品中对 IgG 进行分离纯化。
本产品规格为溶液总体积。
规格价格库存数量
5 mL
¥ 423
5日内发货
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TargetMol 的所有产品仅用作科学研究或药证申报,不能被用于人体,我们不向个人提供产品和服务。请您遵守承诺用途,不得违反法律法规规定用于任何其他用途。
实验操作小课堂
Protein G Agarose产品问题解答
Protein A/G、Protein A、Protein G 和 Protein L 的区别是什么?
Protein A:与IgG的Fc区高亲和结合,适合大多数哺乳动物IgG,尤其是人、兔、小鼠IgG1。 Protein G:结合范围更广,可结合大多数IgG亚型和部分Protein A无法结合的抗体,如鼠IgG3。 Protein A/G:兼具Protein A和Protein G的结合特点,结合范围最广,适合多种抗体。 Protein L:结合轻链κ,适合部分不含Fc区的抗体(如Fab片段)和某些多克隆抗体。
如何纯化抗体 Fab 片段?
a. Protein L可特异性结合抗体的κ轻链,因此,只要Fab片段中包含κ轻链,就可以利用Protein L琼脂糖凝胶进行纯化。 b. Protein G不仅能特异性结合IgG的Fc片段,还能够低亲和力地结合某些抗体的Fab片段,可作为纯化Fab的选择。 c. Protein A仅结合IgG的Fc片段,因此可以采用流穿模式纯化Fab片段。将纯化后的IgG酶解后加载到Protein A琼脂糖凝胶上,Fab片段会随流穿峰流出,而Fc片段则结合在琼脂糖凝胶上。
抗体洗脱后纯度不高该如何解决?
a. 检查洗杂是否彻底。建议收集最后几次洗杂液,通过SDS-PAGE电泳进行分析,确认是否有杂质残留。 b. 优化结合和洗杂条件。在结合步骤中适当提高盐离子浓度,或在洗杂液中添加低浓度非离子型去污剂(如Triton X-100),以减少非特异性吸附。 c. 样品预处理。在上样前对样品进行预处理,去除一些杂质,例如通过离心或过滤去除颗粒和沉淀物。 d. 采用两步纯化策略:第一步:使用亲和层析(如Protein A或Protein G)去除大部分杂质。第二步:结合离子交换层析进一步纯化,可有效去除宿主细胞蛋白(HCP)、脱落的Protein A,以及抗体聚体等杂质,从而获得更高纯度的抗体。
常见问题解答
在做加药实验时,药物对 CCK8 测定是否有影响?如何解决?
有时会有影响。如果药物具有还原性,会和 CCK-8 发生显色反应,增加吸光度。解决办法:首先要确认药物是否有吸收,在含有药物的培养基中加入 CCK-8,测定 450 nm 的吸光度,如果它的吸光度比不含药物的培养基 (加 CCK-8)的吸光度高,则证明药物有影响,可在加 CCK-8 之前更换培养基,去掉药物的影响。
TargetMol蛋白酶抑制剂是否可以和其他公司的磷酸酶抑制剂一起使用?
可以一起使用。
Cocktail 系列的使用方法?
在室温下解冻,开盖前请低速离心一下,以便将黏附于管壁的液体甩至管底。然后在实验前以 1:100(v/v)稀释至溶液样品(细胞裂解液或组织提取液)。
三种磷酸酶抑制剂cocktail的区别
成分功能均不一样,具体信息可在官网进行查询。用哪个需要根据老师的实验需求确定。C0002的抑制范围会相对C0003广泛一点,如果只想买一支又不确定哪个合适的话,推荐C0002。如果想要更全面的抑制,推荐C0004。
使用 CCK8 进行实验后,发现读值低,不变色、没差异等,应该怎么办?
CCK8 在孵育 1-4 小时后,OD 读值在 1-2 之间为佳,线性关系比较好。关于 CCK8 的使用问题,通常建议调整细胞状态、增加种板数量、改变加药浓度、延长孵育时间等。
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Handling Instruction | TargetMol 产品特点

  • 物理化学稳定性良好
  • 配基不易脱落
  • 耐用性强
  • 使用便捷

Handling Instruction | TargetMol 产品应用

  • 从细胞裂解物、细胞分泌上清、血清、腹水等样品中对IgG进行分离纯化。
  • 蛋白质及蛋白质复合物的IP、Co-IP、ChIP和RIP。

Handling Instruction | TargetMol 产品信息

Protein G 琼脂糖凝胶 特性
基质 高度交联的4%琼脂糖凝胶
粒径 30-100 μm
配体 重组Protein G蛋白
结合能力 ≥15 mg hIgG/mL 凝胶
浓度 25%(v/v)

Handling Instruction | TargetMol 操作说明

1. 缓冲液准备
以下为常用的缓冲液成分,使用前建议用 0.22 μm 或 0.45 um 滤膜过滤:
1)平衡/洗杂液:0.15 M NaCl, 20 mM Na2HPO4, pH7.0
2)酸性洗脱液:0.1 M glycine, pH3.0
3)中和液:1 M Tris-HCl, pH8.0

2. 样品准备
1)在上柱之前,应确保样品溶液的离子强度和pH值适当。可以使用平衡液或洗杂液对血清样品、腹水或细胞培养液进行稀释,或者通过透析将样品与平衡液或洗杂液进行平衡处理。
2)为了减少杂质、提高蛋白纯化效率并防止柱子堵塞,建议在上样前对样品进行离心处理或使用0.22 μm或0.45 μm滤膜进行过滤。

3. 琼脂糖凝胶装填:重力柱的装填
1)选择合适规格的重力层析柱,装入下垫片,加入适量纯水以润洗柱管和垫片,然后关闭下出口。
2)将琼脂糖凝胶充分混匀后,使用枪头吸取适量的悬液加入至重力柱中(凝胶实际体积占悬液的一半),打开下出口让保护液流尽。
3)加入适量纯水冲洗凝胶,待柱管中的液体通过重力流干后,关闭下出口。
4)装入已经润洗的上垫片,确保垫片与凝胶之间没有空隙,并保持水平。
5)装填完成的重力柱可以直接加入平衡液进行平衡。如果暂时不使用,可加入保护液并在2-8℃条件下保存。

4. 样品纯化
A. 重力柱法纯化
1)将装填好的琼脂糖凝胶重力柱用5倍柱体积的平衡液进行平衡,使凝胶与目标蛋白的缓冲液体系相同,重复2-3次。
2)将样品加入已平衡的重力柱中,确保样品在柱中至少保留2 min,以确保与凝胶充分接触。收集流出液,可以反复上样以增加结合效率。
3)用10-15倍柱体积的洗杂液进行清洗,去除非特异性吸附的杂蛋白,并收集洗杂液。
4)使用5-10倍柱体积的酸性洗脱液进行洗脱,分段收集洗脱液。每个柱体积收集一管,以检测洗脱效率,确保所有结合的目标蛋白被洗脱,同时获得高纯度和高浓度的蛋白。洗脱组分应立即调至中性,通常建议用1/10体积的中和液进行中和。
:洗脱结束后,先用3倍柱体积的平衡液冲洗,再用5倍柱体积的纯水冲洗,随后用2倍柱体积的20%乙醇冲洗。最后,将凝胶存放于2-8℃下保存。

B. 孵育法纯化
1)根据待纯化样品的量,将琼脂糖凝胶充分混匀后,取适量加入离心管,1000 rpm离心5 min,弃去上清;也可以将其加入重力柱中,待保护液流尽。
2)向离心管中加入5倍凝胶体积的平衡液以清洗凝胶,1000 rpm离心5 min,弃去上清。如使用重力柱,直接在柱中清洗并流尽平衡液。此操作需重复两次以上。
3)加入样品,封闭离心管或重力柱,4°C振荡孵育2-4 h,或在37°C孵育30 min-2 h。
4)孵育结束后,1000 rpm离心5 min,弃去上清,或通过过滤收集凝胶。保留上清以作为流穿样用于电泳鉴定。
5)用5倍凝胶体积的洗杂液清洗凝胶,1000 rpm离心5 min,或在重力柱中过滤去除上清(注意不要吸到凝胶),重复3-5次,建议中途更换新的离心管。
6)加入3-5倍柱体积的酸性洗脱液进行洗脱,室温孵育5 min,1000 rpm离心5 min,或通过重力柱收集洗脱液。可重复2-3次。洗脱组分应立即调至中性,通常建议用1/10体积的中和液进行中和。

5. SDS-PAGE检测
使用SDS-PAGE对纯化过程中得到的样品(包括流出组分、洗杂组分和洗脱组分)以及原始样品进行检测,以评估纯化效果。

6. 凝胶清洗
琼脂糖凝胶可以重复使用而无需再生处理,但随着非特异性结合蛋白的增多和蛋白聚集,可能会导致流速和结合载量的下降。此时可以按照以下方法对凝胶进行清洗:
1)为去除沉淀或变性物质,建议使用2倍柱体积的6 M盐酸胍溶液进行清洗,随后立即用5倍柱体积的PBS(pH 7.4)进行清洗。
2)为去除因疏水性吸附而导致的非特异性吸附物质,可使用3-4倍柱体积的70%乙醇或2倍柱体积的1% Triton X-100进行清洗,之后立即用5倍柱体积的PBS(pH 7.4)进行清洗。

Handling Instruction | TargetMol 保存条件

4℃,2年。

Handling Instruction | TargetMol 注意事项

  1. 凝胶应保存在储存溶液中,防止干燥。
  2. 在从保存管中取出琼脂糖凝胶之前,应充分震荡以确保均匀悬浮。操作过程中注意避免产生气泡。
  3. 本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
  4. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

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