• 非特异性吸附低
• 高效率、高产量、低消耗
• 操作灵活、简便
• 实验结果可靠、重复性高

• 蛋白质及蛋白质复合物的免疫沉淀（IP）和免疫共沉淀（Co-IP）
• 抗体纯化

1. 抗原样品制备
选择合适的裂解液处理细胞样品，按照标准步骤制备抗原样品，置于冰上备用，或于-20℃长期保存。

2. 磁珠预处理
1)将磁珠用漩涡振荡器振荡1 min，使磁珠重新悬浮，取25~50 µL磁珠悬液放入1.5 mL EP管中。
2)加入200 µL Washing Buffer进行洗涤，将EP管放入磁性分离器，静置1 min，进行磁性分离，吸去上清液，取下EP管。重复上述洗涤步骤一次。
3)加入200 µL Washing Buffer重悬磁珠备用。

3. 抗体结合反应
1)抗体工作液的制备：将抗体样品用Washing Buffer稀释至终浓度为5~50 µg/mL，制备成抗体工作液，置于冰上备用。
2)抗体吸附：将步骤2中预处理的磁珠悬液进行磁性分离，吸去上清液。加入200 µL抗体工作液，迅速重悬磁珠，在室温下使用翻转混合仪或手工轻轻翻转EP管混合15 min，然后进行磁性分离，收集上清液，置于冰上备用以供后续检测。
3)洗涤：向EP管中加入200 µL Washing Buffer进行洗涤，轻轻用移液器吹打使磁珠-抗体复合物均匀分散，然后进行磁性分离，吸去上清液，取下EP管。重复上述洗涤步骤一次。

4. 抗原沉淀反应
1)抗原吸附：加入200 µL步骤1中制备的抗原样品，用移液器轻轻吹打，使抗原与磁珠-抗体复合物均匀分散。在室温下使用翻转混合仪或手工轻轻翻转EP管混合10 min，以确保抗原与抗体充分结合。如结合力较弱，可在室温下孵育1 h，或在4℃下孵育过夜。
2)洗涤与转移：将上述完成抗原吸附的磁珠-抗体-抗原复合物进行磁性分离，收集上清液，置于冰上以备后续检测。向EP管中加入200 µL Washing Buffer进行洗涤，用移液器轻轻吹打，使磁珠-抗体-抗原复合物均匀分散，然后进行磁性分离，吸去上清液，取下EP管。重复洗涤两次。最后，加入200 µL Washing Buffer，将磁珠-抗体-抗原复合物悬液转移至新的1.5 mL EP管中，并进行磁性分离，吸去上清液，取下EP管。
注：抗原洗脱前，需将磁珠转移到新的EP管，以避免将管壁上非特异性吸附的蛋白一同洗脱。

5. 抗原洗脱
提供以下两种抗原洗脱方案，用户可根据后续检测的需要选择不同的洗脱方法。
1)变性洗脱法：此方法洗脱的样品适用于SDS-PAGE检测。向EP管中加入100 μL SDS-PAGE Loading Buffer（自备），混合均匀，95℃加热5 min。然后进行磁性分离，收集上清液，进行SDS-PAGE检测。
2)酸性洗脱法：向EP管中加入100 μL Acidity Elution Buffer，置于旋转混合仪上在37℃孵育5-10 min。然后进行磁性分离，收集上清液。如需中和酸性洗脱液，可向100 μL洗脱液中加入50 μL Neutralization Buffer，调整pH至中性。

4℃，2年。

1. 避免冷冻磁珠。磁珠应保存在储存溶液中，防止干燥。
2. 为了减少磁珠的损失，每次磁性分离的时间不应少于1 min。
3. 在从磁珠保存管中取出磁珠之前，应充分震荡以确保均匀悬浮。操作过程中注意避免产生气泡。
4. 建议使用质量较好的移液器吸头和反应管，以避免因磁珠和溶液附着而造成损失。
5. 为确保最佳实验效果，请选择特异性较强的抗体进行免疫沉淀反应。
6. 操作者可根据实际需求，利用抗体结合反应步骤和抗原结合反应步骤中收集的上清液，检测抗体、抗原与磁珠的结合情况。
7. 在IP实验中，不同类型的抗体和抗原结合的亲和力会有所不同。如果使用本试剂盒提供的缓冲体系未能获得理想的实验结果，操作者可以自行筛选和配制缓冲液进行实验。
8. 虽然本磁珠表面包被的重组蛋白Protein A/G在极端条件下（如低pH、加热处理）几乎不会脱落，但仍不建议用于分子量约130 kDa目标蛋白的免疫沉淀实验。
9. 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
10. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

• C0146-Protein AG 琼脂糖磁珠说明书-中文(0.98 MB)