• 结合位点丰富，与配体的特异性结合量高。
• 良好的分散性和重悬性，提高操作的便捷性。
• 良好的物理化学稳定性，保障重复性效果。
• 高磁响应性，节省操作时间。

• 适用于抗凝血因子 III、凝血因子、核酸结合蛋白、脂蛋白、干扰素、类固醇受体、凝血酶及类凝血酶等生物大分子的分离纯化。

注：
a) 磁珠蛋白结合量与目标蛋白特性相关，此处仅做参考值。
b) 1 mL磁珠悬液中含有100 μL磁珠。

以纯化人血浆中抗凝血酶 Ⅲ为例：

1. 缓冲液准备
以下为常用的缓冲液成分，适用于多数蛋白的纯化，使用时可根据需要进行调整。缓冲液在使用前最好使用0.22 μm或0.45 μm滤膜过滤除菌。
1)Binding Buffer：50 mM Tris-HCl, pH 8.0。
2)Elution Buffer：50 mM Tris-HCl, 1~2 M NaCl, pH 8.0。

2. 样品处理
取1 mL人血浆，加入至1.5 mL EP管中，加入500 µL Binding Buffer，充分混匀样品。

3. 磁珠预处理
1)将肝素磁珠用漩涡振荡器振荡充分混匀，取1 mL 10%（V/V）磁珠悬液置于新的1.5 mL EP管中。
2)将EP管放入磁性分离器，静置1 min，进行磁性分离，吸去上清液，取下EP管。
3)用1 mL Binding Buffer洗涤2次，磁性分离后保留磁珠，准备用于后续抗体分离。

4. 蛋白吸附
1)将步骤1处理的样品溶液加入步骤2预处理好的磁珠管中。
2)漩涡振荡混匀，置于室温（约25°C）下，在垂直混合仪中混合15~30 min，使样品与磁珠充分接触吸附。
3)结束后进行磁性分离，吸去上清液。

5. 磁珠洗涤
1)向EP管中加入1 mL Binding Buffer，漩涡振荡1 min使磁珠重悬。
2)进行磁性分离，吸去上清液，重复洗涤3次。
注：根据SDS-PAGE结果，可在Binding Buffer中添加适量 NaCl，以去除非特异性吸附蛋白，提高目标蛋白浓度。

6. 目标蛋白洗脱
1)在洗涤后的磁珠中加入0.2 mL Elution Buffer，用移液器轻轻吹打或涡旋振荡使磁珠迅速重悬。
2)在室温（约25°C）下垂直混合10~15 min后进行磁性分离，收集上清液至新的EP管中。

7. 磁珠再生
1)向EP管中加入1 mL纯化水，漩涡振荡重悬磁珠，进行磁性分离，吸去上清液，重复该操作3次。
2)接着用Binding Buffer 洗涤磁珠3次，保证其清洁状态。

8. 在位清洗（CIP）
磁珠经过多次使用后，可能会有沉淀蛋白、强疏水性蛋白以及脂蛋白等杂质非特异性吸附到磁珠表面，影响其结合效率。为保证磁珠的持续高效使用，建议进行在位清洗（CIP，Clean-In-Place）操作。通过定期清洗，可以有效去除这些杂质，延长磁珠的使用寿命并确保纯化效果。
1)依次使用0.1 M NaOH、8 M 尿素、纯化水和Binding Buffer洗涤磁珠2次。
2)最后加入1 mL Storage Buffer（20%乙醇），重悬磁珠并保存在 2~8°C。

4℃，2年。

1. 避免对磁珠进行冷冻、干燥和高速离心等操作。
2. 为了减少磁珠的损失，每次磁性分离的时间不应少于1 min。
3. 从磁珠保存管中取出磁珠之前，应充分震荡以确保均匀悬浮。操作过程中注意避免产生气泡。
4. 建议使用质量较好的移液器吸头和反应管，以避免因磁珠和溶液附着而造成损失。
5. 磁珠与溶液混合过程中，如果溶液粘稠导致翻转离心管无法重悬磁珠，可以使用移液器吹打或瞬时漩涡混合，使磁珠充分重悬。
6. 可根据需求，用纯化水或缓冲液磁吸洗涤磁珠2~3次，去除保存液中乙醇。
7. 盐浓度与pH值均会影响特异性蛋白的结合与洗脱，建议用户自行摸索不同蛋白的结合和洗脱条件，以保证蛋白纯化量和纯度。
8. 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
9. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

• C0113-肝素磁珠说明书-中文(0.98 MB)