• C0001 蛋白酶抑制剂 Cocktail (EDTA-Free, 100× in DMSO)

• C0045 RIPA裂解液(强)

• C0050 BCA蛋白浓度测定试剂盒

• C0190 SDS-PAGE蛋白上样缓冲液 (5×)

• C0187 考马斯亮蓝快速染色试剂盒

• C2003 特超敏 ECL 化学发光底物

注：
a) 磁珠蛋白结合量与目标蛋白特性相关，此处仅做参考值。
b) 1 mL磁珠悬液中含有100 μL磁珠。

• 非特异性吸附低
• 高效率、高产量、低消耗
• 操作灵活、简便
• 实验结果可靠、重复性高

适用于分离和纯化糖蛋白、膜蛋白、 糖脂、多糖、带甘露糖苷或葡糖苷残基的膜囊泡、IgM、激素脂蛋白等。

1. 缓冲液准备
以下为常用的缓冲液成分，使用时可根据需要进行调整。缓冲液在使用前最好使用0.22 μm或0.45 μm滤膜过滤除菌。
1)结合缓冲液Binding Buffer：20 mM Tris-HCl，0-0.5 M NaCl，1 mM CaCl2，1 mM MnCl2，pH 7.4。
2)洗脱缓冲液Elution Buffer：20 mM Tris-HCl，0.5 M NaCl，1 mM CaCl2，1 mM MnCl2，0.1-1.0 M α-D-甲基甘露糖苷或α-D-甲基葡萄糖苷，pH 7.4。
注：
1)洗脱液中α-D-甲基甘露糖苷或α-D-甲基葡萄糖苷的使用浓度可根据目标蛋白与磁珠之间的结合强度进行适当优化调整。
2)甘露糖或葡萄糖同样可作为竞争性洗脱剂使用，但其洗脱效率通常相对较低。
3)对于结合较为牢固的蛋白，可通过适当降低洗脱液的pH值实现洗脱，但一般不建议低于pH 3.0。
4)亦可选用硼酸盐缓冲体系作为洗脱液，例如0.1 M硼酸盐缓冲液（pH 6.5）。
5)针对高亲和力结合的蛋白，可在洗脱缓冲液中加入约1%脱氧胆酸盐或其他去污剂（如SDS）以增强洗脱效果。
2. 纯化步骤
1)取约200 μL LCA 磁珠悬液（10% V/V）加入至1.5 mL离心管中，将离心管放入磁性分离器，静置1 min，进行磁性分离，吸去上清液，取下离心管。
2)向磁珠中加入1000 μL Binding Buffer，轻轻上下颠倒混匀使磁珠充分重悬，随后置于旋转或垂直混匀仪上在室温条件下混匀约5 min。再次进行磁性分离并去除上清。重复洗涤步骤3次。
3)加入1000 μL含目标蛋白的样品溶液，轻柔混匀使磁珠均匀分散后，在室温下置于混匀仪中孵育30–45 min（具体结合时间可根据目标蛋白的结合速度适当优化）。
4)孵育结束后，将离心管放入磁性分离器进行分离，收集上清并检测目标蛋白浓度，以评估结合情况。
5)向磁珠中再次加入1000 μL Binding Buffer，重悬后在室温下混匀约5 min，随后进行磁性分离并去除上清。重复洗涤步骤3次，以降低非特异性结合。
6)向磁珠中加入约500 μL Elution Buffer，轻轻混匀使磁珠完全悬浮，在室温条件下孵育30–45 min（洗脱时间可根据目标蛋白的结合速度适当优化）。孵育完成后进行磁性分离，收集上清并测定目标蛋白浓度。

4℃，2年。

1. 避免对磁珠进行冷冻、干燥和高速离心等操作。
2. 为了减少磁珠的损失，每次磁性分离的时间不应少于1 min。
3. 从磁珠保存管中取出磁珠之前，应充分震荡以确保均匀悬浮。操作过程中注意避免产生气泡。
4. 建议使用质量较好的移液器吸头和反应管，以避免因磁珠和溶液附着而造成损失。
5. 磁珠与溶液混合过程中，如果溶液粘稠导致翻转离心管无法重悬磁珠，可以使用移液器吹打或瞬时漩涡混合，使磁珠充分重悬。
6. 用户可以根据实际需求保留经磁性分离后移去的上清液，并进行取样检测，以便分析纯化过程并优化蛋白纯化流程。
7. 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
8. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。