Flag Tag Immunoprecipitation Kit

Name: Flag Tag Immunoprecipitation Kit
Brand: TargetMol
SKU: C0120
Price: 3420 CNY
Availability: InStock
Rating: 4.5 (4 reviews)

产品编号 C0120 Flag Tag Immunoprecipitation Kit

Targetmol 的 Flag Tag 免疫沉淀磁珠可特异性地与带有 DYKDDDDK（Flag）标签的蛋白结合，可以用于蛋白质、蛋白质复合物、蛋白质核酸复合物和其他抗原的免疫沉淀（IP）。免疫沉淀磁珠试剂盒配有经过优化的预制缓冲液，为免疫沉淀实验提供了较优的反应条件，增强了实验的稳定性。本品适用于细胞裂解物、细胞分泌上清、血清、腹水等来源的抗原样品。

规格	价格	库存	数量
40 T	¥ 3,420	现货

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实验操作小课堂

Flag Tag Immunoprecipitation Kit产品问题解答

问在免疫共沉淀（IP）实验中，目标蛋白分子量发生变化的原因？

答复合物形成：目标蛋白可能与其他蛋白结合，形成复合物，从而改变其分子量。蛋白降解：目标蛋白可能被酶降解，导致分子量变化。蛋白修饰：目标蛋白在免疫共沉淀前后可能发生了修饰，如磷酸化或乙酰化，影响分子量。解决方案：若目标蛋白在免疫共沉淀前后分子量发生变化，可以进行验证实验，如Western blot或质谱分析。此外，在实验前可对样品进行处理，如使用蛋白酶抑制剂，避免过度处理样品，尽量减少目标蛋白的降解和修饰。

问用磁珠免疫沉淀后，检测有多条非特异条带？

答有非特异性的蛋白结合在磁珠上。建议：在Washing Buffer中加入50-350mM NaCl。加大洗脱力度和次数。

问如何避免磁珠在储存或使用过程中可能出现的聚集情况？

答磁珠应保存在2～8℃，使用时应避免由于污染而导致的不可逆聚集，或因干燥而导致的聚集。磁珠在低pH的洗脱缓冲液中发生聚集属于正常现象，不影响磁珠的正常使用。在缓冲液中添加终浓度为0.1% (v/v)的非离子型去垢剂（如NP-40、Tween-20或Triton X-100）可有效防止磁珠聚集。经过低pH洗脱操作的磁珠可以用Washing Buffer洗涤至中性，然后用含有0.1% (v/v) Tween-20的Tris buffer（pH7.5）振荡重悬磁珠，并用超声波水浴处理2 min，即可使磁珠恢复均匀状态，以上处理均不影响磁珠的抗体结合效率。注：超声处理也会使磁珠在样品溶液中捕获的抗体脱落，所以磁珠在加样后洗脱前不宜使用该方法。

问免疫沉淀试剂盒中的Elution Buffer是什么成分？后续可以做质谱吗？

答Elution Buffer含有甘氨酸，呈酸性条件。洗脱产物可以进行质谱分析。可以在洗脱时加入NaOH进行中和，强酸或强碱会导致产物变性。

问用磁珠免疫沉淀后获得的蛋白量低？

答a. 蛋白质被降解。建议：加入蛋白酶抑制剂。 b. 所使用的磁珠量不够。建议：提高捕获免疫复合物所使用的磁珠量。 c. 样品中的目标蛋白量不够。建议：提高抗原样品量。

常见问题解答

问使用 CCK8 进行实验后，发现读值低，不变色、没差异等，应该怎么办？

答CCK8 在孵育 1-4 小时后，OD 读值在 1-2 之间为佳，线性关系比较好。关于 CCK8 的使用问题，通常建议调整细胞状态、增加种板数量、改变加药浓度、延长孵育时间等。

问在做加药实验时，药物对 CCK8 测定是否有影响？如何解决？

答有时会有影响。如果药物具有还原性，会和 CCK-8 发生显色反应，增加吸光度。解决办法：首先要确认药物是否有吸收，在含有药物的培养基中加入 CCK-8，测定 450 nm 的吸光度，如果它的吸光度比不含药物的培养基 (加 CCK-8)的吸光度高，则证明药物有影响，可在加 CCK-8 之前更换培养基，去掉药物的影响。

问三种磷酸酶抑制剂cocktail的区别

答成分功能均不一样，具体信息可在官网进行查询。用哪个需要根据老师的实验需求确定。C0002的抑制范围会相对C0003广泛一点，如果只想买一支又不确定哪个合适的话，推荐C0002。如果想要更全面的抑制，推荐C0004。

问蛋白酶抑制剂 cocktail C0001 使用时加到蛋白液中的有效抑制时间有多久？

答这个我们暂时没有准确的数据，因为它对不同样品不同蛋白的保护程度是不一样的。一般单次提取以后，不加蛋白酶抑制剂 cocktail 的样品蛋白会在 24 h 后发生明显降解，加了蛋白酶抑制剂 cocktail 的样品蛋白可以维持 48 h 不降解。如果提取后置于 -20℃ 储存的话，一般加了蛋白酶抑制剂 cocktail 的样品蛋白可以至少储存一个月，冻融三次；但时间长了或者冻融次数多了的话，蛋白还是会发生降解的，不同蛋白降解时间不一样的。

问Cocktail 系列的使用方法？

答在室温下解冻，开盖前请低速离心一下，以便将黏附于管壁的液体甩至管底。然后在实验前以 1:100（v/v）稀释至溶液样品（细胞裂解液或组织提取液）。

产品组成

产品编号	产品名称	产品包装
C0120B	Flag Tag Immunomagnetic Beads	1 mL
C0124	Immunomagnetic Beads Cell Lysis Buffer	20 mL
C0125	Immunomagnetic Beads Washing Buffer (10×)	20 mL
C0126	Immunomagnetic Beads Elution Buffer	4 mL
C0127	Immunomagnetic Beads Neutralization Buffer	2 mL

Flag Tag免疫沉淀磁珠	特性
基质	硅基磁珠
粒径	200 nm
磁珠浓度	10 mg/mL
结合能力	≥ 0.6 mg Flag 标签蛋白/mL 磁珠
配体	鼠源抗Flag单克隆抗体
应用推荐	IP, Co-IP

产品特点

非特异性吸附低
高效率、高产量、低消耗
操作灵活、简便
实验结果可靠、重复性高

操作说明

1. 细胞裂解液制备
使用Cell Lysis Buffer处理细胞样品，按照标准步骤制备细胞裂解液，置于冰上备用，或于-20℃长期保存。

2. 磁珠预处理
1)将免疫沉淀磁珠用漩涡振荡器振荡1 min，使磁珠重新悬浮，取25 µL磁珠悬液放入1.5 mL EP管中。
2)用蒸馏水将Washing Buffer (10×)稀释为1×，使用Washing Buffer (1×)进行后续实验。向EP中加入500 μL Washing Buffer进行洗涤，温和翻转EP管数次，使磁珠重新悬浮。将EP管放入磁性分离器，静置1 min，进行磁性分离，吸去上清液，取下EP管。重复上述洗涤步骤2次。

3. 免疫沉淀步骤
1)向EP管中加入500 μL制备好的细胞裂解液，将EP管放在旋转混合仪上，在37℃下旋转混合30 min。如结合力较弱，可在室温下孵育1 h，或在4℃下孵育过夜。
2)孵育结束后，进行磁性分离，弃去或保存上清以供后续分析。
3)向EP管中加入500 μL Washing Buffer进行洗涤。进行磁性分离，吸去上清液，取下EP管，重复洗涤磁珠3次。

4. 抗原洗脱
提供以下几种抗原洗脱方案，用户可根据后续检测的需要选择不同的洗脱方法。
1)变性洗脱法：此方法洗脱的样品适用于SDS-PAGE检测。向EP管中加入100 μL SDS-PAGE Loading Buffer（自备），混合均匀，95℃加热5 min。然后进行磁性分离或者离心（室温，13000 g, 10 min），收集上清液，进行SDS-PAGE检测。
2)中性洗脱法：向EP管中加入50 μL Flag Peptide Elution Buffer（PBS，1 mg/mL 3× Flag peptide (TP1274)，pH 7.4），置于旋转混合仪上在37℃孵育5-10 min（低于 37℃ 时需适当延长孵育时间）。然后进行磁性分离或者离心，收集上清液。为提高抗原回收率，可重复以上步骤。
3)酸性洗脱法：向EP管中加入100 μL Acidity Elution Buffer，置于旋转混合仪上在37℃孵育5-10 min。然后进行磁性分离或者离心，收集上清液。如需中和酸性洗脱液，可向100 μL洗脱液中加入50 μL Neutralization Buffer，调整pH至中性。