ROCK2-IN-13（compound 25）在浓度为30 μM、作用24小时的条件下，表现出对人前列腺癌细胞（PC-3）的显著抗增殖活性（抑制率为84.5%），其在PC-3细胞和LNCaP细胞中的GI50分别为3.7 μM和3.9 μM，显示出强效且一致的效力，并且对正常细胞的细胞毒性明显较低（CCD841细胞的GI50为55.0 μM，HEK-293细胞的GI50为41.8 μM）。ROCK2-IN-13在PC-3细胞中降低了高表达致癌蛋白FOXA2（HNF-3β）的表达以及低水平FOXO1的表达。在浓度为1-10 μM下，该化合物在PC-3和LNCaP细胞中诱导FOXA2 mRNA浓度依赖性减少和FOXO1 mRNA增加，导致核内FOXA2蛋白减少，FOXO1核内积累增强，胞质FOXO1磷酸化降低，并通过PTEN上调最终抑制PI3K/Akt信号轴，提升p27表达和Bax/Bcl-2比值，同时降低细胞周期蛋白D1水平。ROCK2-IN-13（1-10 μM，24小时）在PC-3细胞中降低了处于G1期和S期细胞的比例，并诱导细胞显著积累在G2/M期。该化合物浓度依赖性地在PC-3细胞中诱导细胞凋亡，于10 μM浓度下，早期和晚期凋亡细胞比例分别为15.7%和8.7%。在48小时内，它主要通过激活PTEN来抑制PI3K/Akt信号通路，而非直接抑制EGFR。此外，ROCK2-IN-13（1-10 μM，48小时）在PC-3细胞中可诱导PGC-1α mRNA浓度依赖性增加，并显著降低ROCK1和ROCK2的mRNA表达（对ROCK2效果更明显），减少核内ROCK2蛋白水平，胞质ROCK1不变，增强RNA聚合酶II和PGC-1α对FOXO1启动子区域的转录，并通过促进RNA聚合酶II及关键共调控因子（ROCK1/2、PGC-1α和p300）与PTEN启动子结合，促进PTEN转录。

ROCK2-IN-13 (compound 25) 在前列腺癌移植瘤模型中显示出明显的抗肿瘤活性，剂量为30 和 50 mg/kg，通过腹腔注射，每日一次，持续26天。