PNPG (4-Nitrophenyl β-D-glucopyranoside) is a chromogenic substrate for β-D-glucosidase that, upon enzymatic cleavage, yields a yellow solution.

一、 β-D-葡糖苷酶活性测定
1.材料准备：
1）PNPG 溶液： 将 PNPG 溶解于适量的缓冲液中，常用浓度为 1-5 mM。溶液通常使用磷酸盐缓冲液（PBS，pH 7.0-7.5）配制。
2）酶溶液： β-D-葡糖苷酶的纯化或细胞提取液，酶浓度根据实验需求调整。
3）缓冲液： 通常使用磷酸盐缓冲液（PBS，pH 7.0-7.5）。
2. 实验步骤：
1）配制 PNPG 溶液并加入反应管中。
2）加入适量的 β-D-葡糖苷酶溶液（通常在酶的浓度范围内）并混匀。
3）将反应体系在 37°C 下孵育一定时间（通常为 10-30 分钟）。
4）反应结束后，加入停止液（如 NaOH 溶液）以停止反应，溶液的黄色变色即表明反应完成。
5）用分光光度计在 405 nm 处测定吸光度值。吸光度与酶的活性成正比。
二、应用于酶抑制剂筛选
在添加不同浓度的潜在抑制剂的情况下，测定酶的活性变化，可以用于筛选 β-D-葡糖苷酶的抑制剂。