PFKFB4-IN-1（compound 2v）在浓度为2-100 μM并作用72小时时展现广谱抗癌活性，对MCF-7、HepG2和A549细胞的IC50值分别为4.02 μM、11.07 μM和11.2 μM，而对正常人肝细胞（HL7702，IC50 > 50 μM）的细胞毒性显著降低。在0-48小时内，PFKFB4-IN-1以时间和浓度依赖的方式抑制MCF-7乳腺癌细胞的增殖。在浓度为6-18 μM并作用24小时时，该化合物抑制MCF-7乳腺癌细胞的迁移和克隆形成，并通过caspase-3激活和PARP裂解途径诱导其凋亡。PFKFB4-IN-1在0-25 μM、24小时条件下，可抑制MCF-7细胞中PFKFB4蛋白的表达水平，并抑制糖酵解代谢，显著降低细胞内ATP和NADP+/NADPH水平。该化合物可稳定结合于PFKFB4的ATP结合口袋内，并与Asn168、Gly51和Tyr428残基形成关键氢键。PFKFB4-IN-1不会显著增加MCF-7细胞中的活性氧（ROS）水平和DNA损伤。

PFKFB4-IN-1 以 30 mg/kg 剂量通过腹腔注射，每日一次，连续 14 天，可有效抑制 MDA-MB-231 异种移植小鼠模型中的肿瘤生长。在斑马鱼发育毒性模型中，以 5 μM 的浓度在受精后 24 小时内开始给药并持续暴露 72 小时，PFKFB4-IN-1 显示出良好的急性安全性。