JC-1 (CBIC2) is a fluorescent lipophilic carbocyanine dye. It has been used to measure mitochondrial membrane potential. JC 1 can be used in a probe for measuring mitochondrial membrane potential by flow cytometry.

α-synuclein:2.6 μM (Kd)

JC-1通常由流式细胞仪中常见的488nm激光波长激发[1]。在暴露于小鼠L1210淋巴母细胞的JC-1 (2.5μM)中，可以检测到这些细胞中细胞质中JC-1单体和线粒体J聚集体的存在。通过使用JC-1 (1 μg/mL, 15 min)对线粒体进行荧光标记，揭示了它们在星形胶质细胞内分布不均，导致线粒体含量高低不一的区域[2]。JC-1在敏感的K562细胞中积聚得较多，在这些细胞中表现出绿色的细胞质和红色的线粒体荧光。JC-1在耐药的K562细胞中积聚得较少，这些细胞仅显示出轻微的绿色荧光[4]。已显示JC-1与α-突触核蛋白在酸性C末端区域相互作用，其Kd为2.6μM。在没有铁的情况下，JC-1本身不会加速α-突触核蛋白的聚合过程，相反，它通过延长滞后期来减缓聚合过程[3]。

使用方法
一、溶液制备
1.母液配置：JC-1用DMSO溶解，制备成储备溶液。储备溶液的浓度通常为5mg/ml，具体浓度请参考厂家说明。
2. 工作浓度：JC-1的工作浓度通常为1-20 µg/ml，但最佳浓度可能需要根据细胞类型和实验条件进行优化。
3. 稀释：在使用前，将储备溶液用细胞培养基或适当的缓冲液稀释。
二、染色细胞
1. 细胞准备：在适当条件下（例如，37°C，5% CO₂）培养待实验的细胞。
2. 与JC-1孵育：将稀释后的JC-1工作溶液加入细胞中。根据细胞类型和实验条件，通常孵育15-30分钟。
3. 洗涤：孵育后，用预热的细胞培养基或PBS洗涤细胞1-2次，以去除多余的染料。
三、 荧光检测
1. 荧光显微镜：使用配备合适滤光片的荧光显微镜检测绿色（单体JC-1）和红色（聚集态JC-1）荧光。绿色荧光的激发波长通常为485-490 nm，红色荧光为525-530 nm，发射峰值分别为535 nm（绿色）和590 nm（红色）。
2. 流式细胞术：也可以使用流式细胞术进行定量分析。使用适当的滤光片（例如，绿色荧光使用525/40 nm，红色荧光使用585/42 nm）进行检测。
3. 数据解释：红色荧光的增加表明线粒体膜电位较高，而绿色荧光的增加则表明膜电位丧失或降低。