HADA Hydrochloride (HCC-Amino-D-alanine hydrochloride) is a blue (λem~450 nm) fluorescent D-amino acid (FDAA). FDAAs are efficiently incorporated into the peptidoglycans (PGs) of diverse bacterial species at the sites of PG biosynthesis. HADA Hydrochloride can be used in specific and covalent probing of bacterial growth with minimal perturbation.

FDAA标记对于如大肠杆菌等迅速生长的物种，可能仅需30秒即可完成。尽管HADA Hydrochloride相较于FDL或TDL来说发光较暗且光稳定性较差，但它能最可复制性地且强健地标记大多数细菌物种的PG，通常无需大量优化[1]。

HADA 标记大肠杆菌细胞 PG 位点实验
一、溶液配置
母液配置：用 DMSO 配置 50 mM （100 ×）储备液；（建议分装后于 -20 ℃ 或 -80 ℃ 避光保存）
二、操作步骤
1.从 -80°C 细菌冻存液中，将细胞接种到无菌液体培养基中，并使用最佳的物种特异性条件培养细胞，至少直到实现指数生长。
2.向培养管中加入 10 μL 的 50 mM HADA DMSO 储备液。
3.在新鲜 LB 中将培养物稀释至 OD600 = 0.05；
4.将 990 μL 培养物添加到含有 FDA 的培养管中，以获得最终的 [HADA] = 500 μM 和 [DMSO] = 1% 的 LB 溶液，并在 37°C 下振荡孵育培养物；
5.当培养物达到 OD600 = 0.4 – 0.6 时，对细胞进行沉淀（ 1 分钟，微量离心机中的最大速度，室温）；
6.将细胞重悬于 1 mL 70% （vol/vol） 冰冷的 EtOH 中，并将细胞在冰上固定 10 – 15 分钟。