GPX4-IN-20 (2.5-10 μM；24-72 小时)（化合物 W25）对 HCT-116 细胞具有细胞毒活性。GPX4-IN-20 在 HCT-116 细胞中以 2.5-10 μM 浓度处理 24 小时后，抑制 GPX4 蛋白的表达和活性，并促进通过泛素化的蛋白酶体降解。对于铁死亡的其他关键调控因子，如铁死亡抑制蛋白 1 (FSP1)、铁蛋白重链 1 (FTH1)、核受体共激活因子 4 (NCOA4) 和溶质载体家族 7 成员 11 (SLC7A11)，GPX4-IN-20 没有显著影响。此外，该化合物不影响 GPX4 mRNA 水平。GPX4-IN-20 (0、2.5、5、10 μM；6 小时) 以剂量依赖的方式抑制 HCT-116 细胞的克隆形成，并且在 HT-29 细胞中生长抑制 IC 50 值为 4.60 μM（24 h）。同时，GPX4-IN-20 (0, 2.5, 5, 10 μM；6, 12, 24 小时) 处理显著增加 HCT-116 细胞中的脂质 ROS 水平和降解 GPX4 水平，处理后 MDA 含量也呈剂量依赖性增加。在 HCT-116 细胞中，以 10 μM 浓度处理 24 小时后，GPX4-IN-20 与 GPX4 结合并改变其热稳定性。