Dihydrorhodamine 123 (DHR 123) is a fluorescent probe (λex=488 nm, λem=525 nm).

在10 μM Dihydrorhodamine 123 (DHR 123)存在下，通过加入50 nM phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA)刺激中性粒细胞NADPH氧化酶会导致rhodamine生成速率的增加。同时，在10 μM Dihydrorhodamine 123存在的条件下，经PMA（50 nM）刺激的HL60细胞表现出持续的荧光增强。

一、 检测活性氧（ROS）
1. 溶液准备：将 DHR 123 溶解在适当的溶剂中（如 DMSO 或 PBS），浓度通常为 1-10 μM。
2. 细胞染色：将 DHR 123 溶液加入到培养细胞中，通常在 37°C 下孵育 30-60 分钟。
3. 氧化过程：细胞中产生的 ROS 会氧化 DHR 123，将其转化为荧光产物。
4. 荧光测量：染色后，使用荧光分光光度计或荧光显微镜测量氧化产物的荧光，激发波长为 488 nm，发射波长为 525 nm。
5. 分析：通过荧光强度分析细胞中的 ROS 水平。可以实时或在固定时间点进行实验。
二、 线粒体功能和膜电位评估
1.细胞孵育：按照上述方法孵育细胞。
2.线粒体 ROS 检测：氧化后的 DHR 123 会在荧光显微镜下显示出荧光信号，指示线粒体 ROS 的生成。
3. 荧光显微镜观察：观察荧光信号，查看 ROS 在细胞特定区域（尤其是线粒体）的分布。
三、流式细胞术进行 ROS 定量分析
1. 细胞染色：按照上述方法将 DHR 123 溶液添加到细胞中。
2.流式细胞术分析：孵育后，洗涤细胞并使用流式细胞仪进行荧光分析。荧光强度与样本中的 ROS 水平成正比，可以实现定量分析。