Congo Red (Direct Red 28) is an azo dye. It binding been used as a diagnostic test for the presence of amyloid in tissue sections.

Congo Red 组织化学染色可能作为一种简单的工具，用于探究突变细胞中的聚集体是否具有错误折叠的 β-折叠板二级结构[1]。Congo Red 组织化学染料能特异性地结合到交叉的 β-折叠板结构上。野生型 HSPB1 通过结合非天然构象的蛋白质来维持蛋白质稳态，从而防止底物聚集。然而，T139M 突变体在这一功能上失败，导致错误折叠蛋白质的积累，这些蛋白质是 Congo Red 的靶标，用于插入 β-折叠板结构之间。

使用方法
一、溶液制备
1. Congo Red 工作溶液：将 Congo Red 溶解于蒸馏水或适当的缓冲液中，常用浓度为 0.5–1% (w/v)。
在染色用于淀粉样蛋白时，建议加入高浓度氯化钠（如 80% 饱和氯化钠溶液），以增强染料对淀粉样蛋白的选择性。
2. 碱性酒精分化液（用于染色后分化）：将 1% NaOH 溶于 50% 乙醇中，备用。
3. 对比染色液（如 Mayer 苏木素）：用于染色细胞核，增强对比效果。
二、Congo Red 在淀粉样蛋白染色中的操作步骤
1. 组织切片准备：使用固定液（如 10% 中性缓冲甲醛）固定组织样本，制作石蜡切片（4–6 µm 厚）。将切片脱蜡，并通过梯度乙醇（如 100%、95%、70%）水化切片至水中。
2.染色步骤：将切片浸入 Congo Red 工作溶液中，通常染色 20–30 分钟。之后用流水轻轻冲洗切片，去除未结合的染料。
3.分化步骤：将染色后的切片浸入碱性酒精分化液中（约 30 秒至 1 分钟），以减少非特异性背景染色。使用流水冲洗切片，并观察染色效果。
4. 对比染色：可选用 Mayer 苏木素对切片染核（约 1–3 分钟），随后使用流水清洗，并用 0.5% 氨水返回蓝色。
5. 脱水和封片：使用梯度乙醇（如 70%、95%、100%）依次脱水，随后用二甲苯透明切片，并用中性树胶封片。
6. 显微镜观察：淀粉样蛋白在 Congo Red 染色后呈现橙红色，在偏光显微镜下观察时可见典型的绿色双折射现象，这是 Congo Red 特异性检测淀粉样蛋白的关键特征。
注意事项
1.染液新鲜：Congo Red 工作溶液需定期更换以确保染色效果，避免染液因长期使用而失效。
2.背景染色：分化步骤对于减少非特异性背景染色至关重要，可优化分化时间或碱性酒精浓度。
3. 环境控制：染色需在常温条件下进行，并避免长时间暴露在高温环境中。
4.光敏性：Congo Red 染液和染色的切片均需避光保存，以避免光降解。