Collagenase Type III溶解于缓冲液（常用浓度为0.1%-1mg/mL），与组织样本在37°C孵育1-2小时后，通过离心洗涤获得细胞。该方法常用于从乳腺组织中制备原代细胞[1]。
实验步骤: 1.储存液配制
（1）准确称取100mg胶原酶，缓慢加入含有Ca²⁺、Mg²⁺的1mL Hank平衡盐溶液（HBSS）中，随后通过振荡促进其充分溶解，成功制备出浓度为100mg/mL（即100×）的储存液。
（2）使用0.22μm滤膜过滤除菌，立即使用或分装成小份量，在-20°C至-5°C的低温环境下避光冷冻保存，以确保溶液的质量和活性不受影响。
（3）需要根据特定的实验条件或参考文献资料确定所需浓度。用于组织和细胞分散的常用浓度为0.5-2.5mg/mL，用于软骨消化的常用浓度为1-2mg/mL。
2.实验方法
（1）将目标组织（如乳腺组织、结肠癌干细胞等）清洗干净，去除多余杂质。
（2）根据实验需求，将Collagenase Type III溶解于适当的缓冲液中，通常浓度为1-2mg/mL。
（3）将组织样本置于酶溶液中，通常在37°C下孵育1-2小时，具体时间根据组织类型和实验需求调整。
（4）加入适量的终止液（如含血清的培养基）以停止酶的活性。
（5）通过离心或过滤等方法分离出所需的细胞。