ALK/ROS1-IN-5 (compound X4) is a selective inhibitor of ALK and ROS1 kinases, with IC50 values of 0.512 μM for ALK and 0.766 μM for ROS1. It inhibits H2228 cells with an IC50 of 0.034 μM and induces apoptosis in cancer cells in a dose-dependent manner. Additionally, ALK/ROS1-IN-5 effectively suppresses the expression of p-ALK and p-ERK in cancer cells.

ALK/ROS1-IN-5 在不同浓度下（0-100 μM, 72 h）对H2228, H1975 和 H460 细胞展示出优异的抑制活性 [1]。在10 μM浓度下，ALK/ROS1-IN-5 显著抑制包括EGFR, AKT1, FGFR1 和 ERK1 在内的酪氨酸激酶家族成员 [1]。此外，ALK/ROS1-IN-5 对ALK和ROS1的激酶活性抑制率分别为94.34%和94.27% [1]。在1-2 μM, 24小时条件下，ALK/ROS1-IN-5 可剂量依赖性地抑制H2228细胞的迁移，并诱导细胞凋亡和细胞周期阻滞 [1]。同时，该化合物在0.1-0.5 μM, 24小时时剂量依赖性地减少ALK和ERK的磷酸化程度 [1]。

ALK/ROS1-IN-5 每日口服给药 60 或 120 mg/kg 持续 7 天，对小鼠血液生化样品未显示明显毒性 [1]。在 10 mg/kg 剂量下，每日口服给药 35 天，展现出显著的抗肿瘤活性 [1]。剂量在 5 至 25 mg/kg 的每日口服给药 14 天，对网织红细胞减少的影响微乎其微 [1]。在 25 至 50 mg/kg 的剂量下，每日口服给药 21 天后，药物组的肿瘤体积增长率低于阳性对照组 [1]。ALK/ROS1-IN-5 以剂量依赖方式降低 Ki67、Bcl2、Caspase 3 和 PCNA [1]。