一、生物分子标记

1. 材料准备：
   1）5-TAMRA 溶液：配制为 1–10 mM 的溶液，溶解在无水 DMF（N,N-二甲基甲酰胺）或 DMSO 中。
   2）目标分子（如抗体、核酸探针等）。
   3）偶联缓冲液：常用的有 PBS 缓冲液或其他适当的生物化学缓冲液（pH 7.0–8.5）。
   4）偶联试剂：如 EDC（1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide）或 NHS（N-hydroxysuccinimide）。
2. 步骤：
   1）偶联反应： 将 5-TAMRA 溶液与目标分子（如抗体、核酸探针等）按照适当的摩尔比（通常为 1:1 至 1:10）加入偶联缓冲液中，加入偶联试剂（如 EDC 或 NHS）激活分子上的羧基，促进 5-TAMRA 与目标分子上的氨基结合。
   2）反应条件： 将反应体系在室温下反应 1–2 小时，或根据具体的偶联反应要求调整时间和温度。
   3）洗涤： 通过透析、凝胶过滤或其他适当的方法去除未反应的染料和偶联试剂。
   4） 检测和分析： 通过荧光分光光度计或荧光显微镜测定标记分子的荧光强度。通常使用激发波长 546 nm，发射波长 579 nm 进行检测。
   二、实时 PCR 标记
   1.材料准备：
   1）5-TAMRA 荧光探针（通常作为报告染料）与 FAM、VIC 或其他靶向染料配合使用。
   2）PCR 引物和模板。
3. 步骤：
   1）设计探针： 将 5-TAMRA 标记的探针与特定的 DNA 序列匹配，通常选择具有高特异性的序列。
   2）PCR 反应： 在实时 PCR 实验中使用标记了 5-TAMRA 的探针，检测 PCR 扩增过程中荧光信号的变化。