5(6)-CFDA (5-(6)-Carboxyfluorescein diacetate) is a cell-permeant esterase substrate that can serve as a viability probe that measures both enzymatic activities, which is required to activate its fluorescence, and cell-membrane integrity, which is required for intracellular retention of their fluorescent product.

使用方法
一、试剂准备
储备液和工作液的配置：使用适当的溶剂（如二甲基亚砜（DMSO））溶解，制备储备溶液；储备溶液浓度通常为 1–10 mM，然后根据实验要求将其稀释至工作浓度（通常为 1–5 μM）。
二、操作步骤
细胞染色过程
1.细胞孵育：
1）将待检测细胞接种到培养皿或多孔板中。
2）添加 5(6)-CFDA 溶液至细胞，确保浓度为工作浓度（通常为 1–5 μM），并在 37°C 下孵育 30 分钟至 1 小时。孵育时间可根据细胞类型和实验要求调整。
2. 洗涤：孵育后，使用适当的培养基或 PBS 清洗细胞，以去除未水解的染料。
3.细胞成像：清洗后，可通过荧光显微镜或其他成像设备进行分析。5(6)-CFDA 会在 492 nm 激发下发出强烈的绿色荧光，便于观察染色后的细胞。
4.流式细胞术：对染色后的细胞进行流式细胞分析，荧光强度可用来评估细胞的活性、增殖情况或其他相关特征。
5.e. v数据分析：
1）根据荧光强度变化，可以评估细胞的活性、增殖等过程。
2）可通过标准曲线或对照实验组与实验组的比较，进一步分析数据。
6. 应用：
1）细胞存活和增殖检测： 5(6)-CFDA 常用于细胞存活和增殖检测，在细胞水解染料后，荧光强度与细胞数量成正比。
2）细胞摄取研究： 可用于研究细胞对染料的摄取和在细胞内的分布。
3）长期标记： 由于染料被细胞水解，它可以用于长期标记细胞，在增殖实验和长期培养研究中具有应用价值。
注意事项：
1.细胞渗透性： 5(6)-CFDA 是细胞渗透性的，但其水解成荧光产物依赖于细胞内酯酶的活性。因此，只有活细胞才会显示荧光。
2.溶剂使用： 确保用于溶解染料的溶剂（如 DMSO）不会影响细胞活性。
3.光敏性： 5(6)-CFDA 对光敏感，因此在操作和储存过程中应避免强光照射，以防止荧光漂白。