VB6 Assay Kit (Spectrophotometry)

Name: VB6 Assay Kit (Spectrophotometry)
Brand: TargetMol
SKU: CB0308S
Rating: 5 (4 reviews)

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产品编号 CB0308S

别名 维生素B6检测试剂盒（分光光度法）

维生素B6（Vitamin B6, VB6）又称吡哆素，其包括吡哆醇、吡哆醛及吡哆胺，在体内以磷酸酯的形式存在，是一种水溶性维生素，在细胞中参与多种蛋白质和氨基酸的代谢，对生物体具有极其重要的作用。

规格	价格	库存	数量
50 T	¥ 1,078	10-12日内发货

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实验操作小课堂

常见问题解答

检测原理

VB6与4-氨基安替比林在强氧化剂作用下生成稳定的黄色化合物，在400nm有特征吸收峰。

产品规格

50T/48S规格的产品组成及保存条件：

编号	规格	储存条件
CB0308S-ES	35mL×1瓶	4℃保存
CB0308S-A	15mL×1瓶	4℃保存
CB0308S-B	20mL×1瓶	4℃避光保存
CB0308S-C	20mL×1瓶	4℃避光保存
CB0308S-Standard	粉剂×1支	4℃保存；临用前加入 1 mL蒸馏水，配成 5mg/mL 的标准液

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

操作说明

一、自备用品：
可见分光光度计、1ml玻璃比色皿、天平、研钵、离心机、恒温水浴锅、蒸馏水。

二、粗酶液提取：
1.组织：将样品磨碎，按照质量（g）：提取液体积（mL）为1：5~10的比例（建议称取约0.1g，加入0.6mL CB0308S-ES）加入提取液，60℃浸提30min，加蒸馏水0.4mL，混匀后于25℃，13000g离心10min，取上清测定（动物组织等蛋白含量较高的样本建议离心20-30分钟）。
2.细胞：按照细胞数量（10⁴个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入0.6mL CB0308S-ES），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；加蒸馏水0.4mL，混匀后于25℃，13000g离心10min，取上清测定。
3.血清等液体：直接测定。

三、测定步骤：
1.可见分光光度计调节波长到400nm，蒸馏水调零。
2.将 5mg/mL 标准液用蒸馏水稀释为 250、125、62.5、31.25、15.625、7.8μg/mL 的标准溶液备用。
3.在EP管中依次加入下列试剂：

	测定管（μL）	标准管（μL）	空白管（µL）
蒸馏水			200
样品	200
标准液		200
CB0308S-A	200	200	200
CB0308S-B	300	300	300
CB0308S-C	300	300	300
充分混匀，室温反应30min 左右（视情况而定，液体变黄色为止），于1mL玻璃比色皿，测定400nm处吸光值，记为A空白管、A标准管和A测定管，ΔA标准=A标准管-A空白管。空白管只需做1-2管。

四、VB6计算公式：
标准曲线的绘制：
以各个标准溶液的浓度为 x 轴，其对应的 ΔA标准为 y 轴，绘制标准曲线，得到标准方程 y=kx+b，将 ΔA 带入方程得到 x(μg/mL)。
1.按蛋白浓度计算
VB6含量 (μg/mg prot) = x×V提取÷(V提取×Cpr)= x÷Cpr
2.按样本鲜重计算
VB6含量 (μg/g) = x×V提取÷W=0.6x÷W
3.按细胞数量计算
VB6含量 (μg/10⁴ cell) = x×V提取÷细胞数量(万个)=0.6x÷细胞数量(万个)
4.按液体体积计算
VB6含量 (μg/mL) = x×V样÷V样=x
注：V样：加入样本体积，0.2mL；V提取：样本提取体积，0.6mL；Cpr：样本蛋白浓度，μg/mL；W：样本质量，g；

注意事项

1.蛋白定量测定，建议使用TargetMol生产的BCA Protein Quantification Kit (C0050)。
2.若测定结果中吸光值超过线性范围吸光值，请将样本稀释后进行测定，并在计算公式中乘以稀释倍数。
3.蛋白浓度较高的样品，比如动物组织，若显色完成后有沉淀产生，将样本稀释后再测定，在计算公式中乘以稀释倍数。
4.显色完成后立即进行测定。
5.本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
6.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。