VB6 Assay Kit (Microanalysis)

VB6与4-氨基安替比林在强氧化剂作用下生成稳定的黄色化合物，在400nm有特征吸收峰。

100T/96S规格的产品组成及保存条件： 

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

一、自备用品：
可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、天平、研钵、离心机、恒温水浴锅、蒸馏水。

二、粗酶液提取：
1.组织：将样品磨碎，按照质量（g）：提取液体积（mL）为1：5~10的比例（建议称取约0.1g，加入0.6mL CB0308M-ES）加入提取液，60℃浸提30min，加蒸馏水0.4mL，混匀后于25℃，13000g离心10min，取上清测定（动物组织等蛋白含量较高的样本建议离心20-30分钟）。
2.细胞：按照细胞数量（10⁴个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入0.6mL CB0308M-ES），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；加蒸馏水0.4mL，混匀后于25℃，13000g离心10min，取上清测定。
3.血清等液体：直接测定。

三、测定步骤：
1.可见分光光度计/酶标仪，调节波长到400nm，蒸馏水调零。
2.将 10mg/mL 标准液用试剂A稀释为 1、0.5、0.25、0.125、0.0625、0.03125、0.015625mg/mL 的标准溶液备用。
3.在EP管中依次加入下列试剂：

四、VB6计算公式：
标准曲线的绘制：
以各个标准溶液的浓度为 x 轴，其对应的 ΔA标准为 y 轴，绘制标准曲线，得到标准方程 y=kx+b，将 ΔA 带 入方程得到 x(mg/mL)。
1.按蛋白浓度计算
VB6含量 (mg/mg prot) = x×V提取÷(V提取×Cpr)= x÷Cpr
2.按样本鲜重计算
VB6含量 (mg/g) = x×V提取÷W=x÷W
3.按细胞数量计算
VB6含量 (mg/10⁴ cell) = x×V提取÷细胞数量(万个)=x÷细胞数量(万个)
4.按液体体积计算
VB6含量 (mg/mL) = x×V样÷V样=x
注：V反总：反应总体积，0.2mL；V样：加入样本体积，0.04mL；V样总：加入提取液体积，1mL；Cpr：蛋白浓度，mg/mL；W：样本质量，g。V提取：样本提取体积，1mL；V样：加入的样本体积，0.04mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W：样本质量，g。

1.蛋白定量测定，建议使用TargetMol生产的BCA Protein Quantification Kit (C0050)。
2.若测定结果中吸光值超过线性范围吸光值，请将样本稀释后进行测定，并在计算公式中乘以稀释倍数。
3.蛋白浓度较高的样品，比如动物组织，若显色完成后有沉淀产生，将样本稀释后再测定，在计算公式中乘以稀释倍数。
4.显色完成后立即进行测定。
5.本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
6.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。