VB1 Assay Kit (Spectrophotometry)

VB1在碱性条件下还原铁氰化钾生成亚铁氰化钾，亚铁氰化钾与Fe³⁺在弱酸条件下生成普鲁士蓝，在704nm有特征吸收峰。

50T/48S规格的产品组成及保存条件： 

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

一、自备用品：
可见分光光度计、1 mL玻璃比色皿、恒温水浴锅、天平、研钵、离心机、蒸馏水。

二、粗酶液提取：
1.组织：将样品磨碎，按照质量（g）：提取液体积（mL）为1：5~10的比例（建议称取约0.1g，加入0.6mL CB0190S-A）加入提取液，60℃浸提30min，加蒸馏水0.4mL，混匀后于25℃，13000g离心10min，取上清测定（动物组织等蛋白含量较高的样本建议离心20-30分钟）。
2.细胞：按照细胞数量（10⁴个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入0.6mL CB0190S-A），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；加蒸馏水0.4mL，混匀后于25℃，13000g离心10min，取上清测定。
3.血清等液体：直接测定。

三、测定步骤：
1.分光光度计预热30min，调节波长到704nm，蒸馏水调零。
2.在EP管中依次加入下列试剂：

四、VB1计算公式：
标准曲线：y = 0.017x+0.0031，R² = 0.9991；x为标准品浓度：μg/mL；y为ΔA(A测定管-A空白管)
1.按蛋白浓度计算
VB1含量 (μg/mg prot) = (ΔA-0.0031)÷0.017÷Cpr = 58.8×(ΔA-0.0031)÷Cpr
2.按样本鲜重计算
VB1含量 (μg/g鲜重) = (ΔA-0.0031)÷0.017÷(W÷V样总) = 58.8×(ΔA-0.0031)÷ W
3.按细胞数量计算
VB1含量 (μg/10⁴ cell) = (ΔA-0.0031)÷0.017÷(细胞数量÷V样总) = 58.8×(ΔA-0.0031)÷细胞数量
4.按液体体积计算
VB1含量 (μg/mL) = (ΔA-0.0031)÷ 0.017 = 58.8×(ΔA-0.0031)
注：V样总：加入提取液体积，1mL； Cpr：蛋白浓度，mg/mL；W：样本质量，g。

1.蛋白定量测定，建议使用TargetMol生产的BCA Protein Quantification Kit (C0050)。
2.若测定结果中吸光值超过1，请将样本稀释后进行测定，并在计算公式中乘以稀释倍数。
3.蛋白浓度较高的样品，比如动物组织，若显色完成后有沉淀产生，将样本稀释后再测定，在计算公式中乘以稀释倍数。
4.显色完成后立即进行测定。
5.标准曲线线性范围为0.1-10ug/mL。
6.本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
7.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。