VB1在碱性条件下还原铁氰化钾生成亚铁氰化钾，亚铁氰化钾与Fe³⁺在弱酸条件下生成普鲁士蓝，在704nm有特征吸收峰。

100T/96S规格的产品组成及保存条件： 

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

一、自备用品：
可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、天平、研钵、离心机、恒温水浴锅、蒸馏水。

二、粗酶液提取：

1. 组织：将样品磨碎，按照质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g，加入0.6mL AK520
   A）加入提取液，60℃浸提30min，加蒸馏水0.4mL，混匀后于25℃，13000g离心10min，取上清测定（动物组
   织等蛋白含量较高的样本建议离心20-30分钟）。
2. 细胞：按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入0.6mL AK520
   A），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；加蒸馏水0.4mL，混匀后于25℃，
   13000g 离心10min，取上清测定。
3. 血清等液体：直接测定。

三、测定步骤：
1.可见分光光度计/酶标仪，调节波长到704nm，蒸馏水调零。
2.在EP管中依次加入下列试剂：

四、VB1计算公式：
标准曲线的绘制：
以各个标准溶液的浓度为 x 轴，其对应的 A 标准为 y 轴（A空白为标准品0点），绘制标准曲线，得到标准方程 y=kx+b，将 A测定带入方程得到 x（mg/mL）。

1. 按蛋白浓度计算
   VB1 含量 (mg/mg prot) = x×V 提取÷（V提取×Cpr）= x÷Cpr
2. 按样本鲜重计算
   VB1 含量 (mg/g) = x×V 提取÷W=0.6x÷W
3. 按细胞数量计算
   VB1 含量 (mg/10⁴ cell) = x×V 提取÷细胞数量（万个）=0.6x÷细胞数量（万个）
4. 按液体体积计算
   VB1 含量 (mg/mL) = x×V 样÷V 样= x
   注：V样：加入样本体积，0.02mL；V 提取：样本提取体积，0.6mL；Cpr：蛋白浓度，mg/mL；W：样本质量，g。

1.蛋白定量测定，建议使用TargetMol生产的BCA Protein Quantification Kit (C0050)。
2.若测定结果中吸光值超过2，请将样本稀释后进行测定，并在计算公式中乘以稀释倍数。
3.蛋白浓度较高的样品，比如动物组织，若显色完成后有沉淀产生，将样本稀释后再测定，在计算公式中乘以稀释倍数。
4.显色完成后立即进行测定。
5.标准曲线线性范围为0.1-10ug/mL。
6.本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
7.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。