Sucrase Assay Kit (Microanalysis)

本试剂盒采用3.5-二硝基水杨酸法测定蔗糖酶催化产生的还原糖的含量，由此可得出蔗糖酶水解速度。其原理是3.5-二硝基水杨酸与还原糖共热被还原成棕红色的氨基化合物，在一定范围内还原糖的量和反应液的颜色深度成正比。此法操作简便、迅速、杂质干扰较小。

100T/48S规格的产品组成及保存条件： 

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

一、自备用品：
可见分光光度计/酶标仪、恒温水浴锅、移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。

二、样本的前处理：
1.按照组织质量（g）：CB0252M-ES体积（mL）为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL CB0252M-ES），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

三、测定步骤：
1.分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至540nm，蒸馏水调零。
2.标准品的制备：将标准品用蒸馏水稀释至1.5、1、0.8、0.6、0.4、0.2、0mg/mL（0mg/mL为空白管）。
3.样本测定（在微量玻璃比色皿或96孔板中依次加入下列试剂）：

四、蔗糖酶活力计算：
1.标准曲线的绘制：
以标准液的浓度(mg/mL)为 x 轴，对应的 ΔA标准为 y 轴绘制标准曲线，得到标准方程 y=kx+b，将 ΔA测定代入方程中计算得到样本浓度(x，mg/mL)。
2.蔗糖酶活力计算：
(1)按照蛋白浓度计算
单位定义：每mg组织蛋白每分钟催化水解1μg蔗糖定义为一个酶活力单位。
蔗糖酶活力 (U/mg prot) = [1000×x×V1]÷(V1×Cpr)÷T = 100x÷Cpr
(2)按样本鲜重计算
单位定义：每g组织每分钟催化水解1μg蔗糖定义为一个酶活力单位。
蔗糖酶活力 (U/g鲜重) = [1000×x×V1]÷(W×V1÷V2)÷T = 100x÷W
注：1000：1mg/mL=1000μg/mL；V1：加入反应体系中样本体积，0.03mL；V2：加入提取液体积，1mL；T：反应时间，10min； Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本鲜重，g。

1.蛋白定量测定，建议使用TargetMol生产的BCA Protein Quantification Kit (C0050)。
2.本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
3.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。