Sucrase Assay Kit (Spectrophotometry)

Name: Sucrase Assay Kit (Spectrophotometry)
Brand: TargetMol
SKU: CB0252S
Rating: 5 (4 reviews)

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产品编号 CB0252S

别名 植物蔗糖酶活性检测试剂盒（分光光度法）

蔗糖酶（sucrase, EC 3.2.1.26）是碳水化合物消化吸收的关键酶之一，能够水解蔗糖变成相应的单糖而被机体吸收。

规格	价格	库存	数量
50 T	¥ 616	4-6日内发货

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实验操作小课堂

常见问题解答

检测原理

本试剂盒采用3.5-二硝基水杨酸法测定蔗糖酶催化产生的还原糖的含量，由此可得出蔗糖酶水解速度。其原理是3.5-二硝基水杨酸与还原糖共热被还原成棕红色的氨基化合物，在一定范围内还原糖的量和反应液的颜色深度成正比。此法操作简便、迅速、杂质干扰较小。

产品规格

50T/24S规格的产品组成及保存条件：

编号	规格	储存条件
CB0252S-ES	30mL×1瓶	4℃保存；
CB0252S-A	4mL×1瓶	4℃保存；
CB0252S-B	粉剂×1支	4℃保存，用时加入2.5mL蒸馏水充分溶解；剩余试剂4℃保存；
CB0252S-C	7mL×1瓶	常温保存；
CB0252S-Standard	粉剂×1支	用时加入 1 mL 蒸馏水充分溶解，制备 10 mg/mL 葡萄糖标准溶液待用；用不完的试剂 4℃保存一周。

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

操作说明

一、自备用品：
可见分光光度计、恒温水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

二、样本的前处理：
按照组织质量（g）：CB0252S-ES体积（mL）为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL CB0252S-ES），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

三、测定步骤：
1.分光光度计预热30min以上，调节波长至540nm，蒸馏水调零。
2.标准品的制备：将标准品用蒸馏水稀释至1.5、1、0.8、0.6、0.4、0.2、0mg/mL（0mg/mL为空白管）。
3.样本测定：

试剂名称	对照管（μL）	测定管（μL）	标准管（μL）	空白管（μL）
CB0252S-A	50	50	50	50
蒸馏水	50			100
标准溶液			100
样本	100	100
CB0252S-B		50	50	50
置于25℃准确水浴10min
CB0252S-C	100	100	100	100
混匀， 100℃水浴10min左右（盖紧，防止水分散失），冷却至室温
蒸馏水	700	700	700	700
混匀，540nm蒸馏水调零，测定各管吸光值，分别记为A对照管，A测定管，A标准管，A空白管。计算 ΔA=A测定管-A对照管，ΔA标准=A标准管-A空白管。每个测定管需设一个对照管（标准曲线只需检测 1-2 次）。

四、蔗糖酶活力计算：
1.标准曲线的绘制：
以标准液的浓度(mg/mL)为 x 轴，对应的 ΔA标准为 y 轴绘制标准曲线，得到标准方程 y=kx+b，将 ΔA测定代入方程中计算得到样本浓度(x，mg/mL)。
2.蔗糖酶活力计算
(1)按照蛋白浓度计算
单位定义：每mg组织蛋白每分钟催化水解1μg蔗糖定义为一个酶活力单位。
蔗糖酶活力 (U/mg prot) = [1000×x×V1]÷(V1×Cpr)÷T = 100x÷Cpr
(2)按样本鲜重计算
单位定义：每g组织每分钟催化水解1μg蔗糖定义为一个酶活力单位。
蔗糖酶活力 (U/g鲜重) = [1000×x×V1]÷(W×V1÷V2)÷T = 100x÷W
注：1000：1mg/mL=1000μg/mL；V1：加入反应体系中样本体积，0.1mL；V2：加入提取液体积，1mL；T：反应时间，10min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本鲜重，g。