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50 T

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检测原理

土壤硝酸还原酶 (S-NR) 催化硝酸盐还原为亚硝酸盐，NO₃ˉ + NADH + H⁺→ NO₂ˉ + NAD⁺+ H₂O；产生的亚硝酸盐能够在酸性条件下，与对–氨基苯磺酸及 α - 萘胺定量生成红色偶氮化合物；生成的红色偶氮化合物在 540 nm 有最大吸收峰，可用分光光度法测定。

产品规格

50T/24S规格的产品组成及保存条件：

编号	规格	储存条件
CB0157V-A	10mL×1 瓶	-20℃保存；
CB0157V-B	4mL×1 瓶	-20℃保存；
CB0157V-C	12.5mL×1 瓶	4℃保存（如出现结晶析出，60 度水浴溶解后使用）。
CB0157V-D	12.5mL×1 瓶	4℃保存；
CB0157V-E	1mL×1 支	(10µmol/mL 亚硝酸钠)，-20℃保存；
0.1μmol/mL 标准液配制：临用前取0.1ml CB0157V-E加蒸馏水至10ml

正式测定前务必取2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

操作说明

一、自备用品：
可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

二、测定步骤：
1.分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 540nm，蒸馏水调零。
2.打开水浴锅，调节温度到 37℃。
3.在 EP 管中依次加入下列试剂：

试剂名称	测定管（µL）	对照管（µL）	标准管（µL）	空白管（µL）
风干土样（g）	0.1 g	0.1 g
0.1μmol/mL 标准液			100
蒸馏水		500		600
CB0157V-A	375		375
CB0157V-B	125		125
混匀，盖盖后， 37℃水浴 60min，8000g 25℃离心 10min，取上清液
上清液	400	400	400	400
CB0157V-C	250	250	250	250
CB0157V-D	250	250	250	250
混匀，显色 20min 后，4000g，25℃离心 10min，用蒸馏水调零，540nm 下读取各管吸光值。记为 A测定管、A对照管、A标准管、A空白管。

注意：标准管和空白管只需测一次。每个测定管设一个对照管。

2.将培养结束的上清液稀释 10 倍（取 0.1mL 上清液，加入 0.9mL 蒸馏水），若吸光值仍大于
1继续稀释。
3.标准品的准备：吸取适量的标准溶液，用蒸馏水稀释至10、8、6、4、2、1、0.5、0μg/mL。
4.测氨量，分光光度计/酶标仪预热 30 min，调节波长到 630nm。在微量玻璃比色皿或96孔板中加入下列试剂：

试剂名称	测定管（µL）	对照管（µL）	标准管（µL）
稀释后的上清液或标准品	120	120	120
CB0152M-D	40	40	40
CB0152M-E	40	40	40
充分混匀，室温放置 20min
充分混匀，微量玻璃比色皿需要用蒸馏水调零，96 孔板不需要调零，于 630nm 处读取吸光值 A，分别记为 A测定管、A对照管、A标准管、A空白管。计算ΔA测定=A测定管-A对照管，ΔA标准=A标准管-A空白管。注意：每个测定管设一个对照管；标准曲线和空白管只需测 1-2 次。

三、S-NR 活性计算：
单位的定义：每天每 g 土样中产生 1μmol NO₂ 的量为一个 S-NR 活力单位。
S-NR活性 (μmol/d/g) = C 标准×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)×V反总÷W÷T = 12×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)
注： C 标准管：标准管浓度，0.1μmol/mL；V反总：反应体系总体积，0.5mL；T：反应时间，1h=1/24d； W：样本质量，0.1g。

Soil Nitrate Reductase Assay Kit (Visible Spectrophotometry)

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