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100 T

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检测原理

土壤硝酸还原酶 (S-NR) 催化硝酸盐还原为亚硝酸盐，NO₃ˉ + NADH + H⁺→ NO₂ˉ + NAD⁺+ H₂O；产生的亚硝酸盐能够在酸性条件下，与对–氨基苯磺酸及 α - 萘胺定量生成红色偶氮化合物；生成的红色偶氮化合物在 540 nm 有最大吸收峰，可用分光光度法测定。

产品规格

100T/48S规格的产品组成及保存条件：

编号	规格	储存条件
CB0157M-A	12mL×1 瓶	-20℃保存；
CB0157M-B	5mL×1 瓶	-20℃保存；
CB0157M-C	10mL×1 瓶	4℃保存（如出现结晶析出，60 度水浴溶解后使用）；
CB0157M-D	10mL×1 瓶	4℃保存；
CB0157M-E	1mL×1 支	(10µmol/mL 亚硝酸钠)，-20℃保存；
0.1μmol/mL 标准液配制：临用前取0.1ml CB0157M-E加蒸馏水至10ml

正式测定前务必取2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

操作说明

一、自备用品：
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96 孔板、研钵、冰和蒸馏水、30-50目筛。

二、土样处理：
新鲜土样自然风干或 37 度烘箱风干，过 30~50 目筛。

三、测定步骤：
1.分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 540nm，蒸馏水调零。
2.打开水浴锅，调节温度到 37℃。
3.在 EP 管中依次加入下列试剂：

试剂名称	测定管（µL）	对照管（µL）	标准管（µL）	空白管（µL）
风干土样（g）	0.06 g	0.06 g
0.1μmol/mL 标准液			60
蒸馏水		300		360
CB0157M-A	225		225
CB0157M-B	75		75
混匀，盖盖后， 37℃水浴 60min，8000g 25℃离心 10min，取上清液
上清液	130	130	130	130
CB0157M-C	85	85	85	85
CB0157M-D	85	85	85	85
混匀，显色 20min 后，4000g，25℃离心 10min，取 200μL 上清液至微量石英比色皿或 96孔板中，540nm 下读取各管吸光值。记为 A测定管、A对照管、A标准管、A空白管。

注意：标准管和空白管只需测1-2次，每个测定管设一个对照管。

四、S-NR 活性计算：
单位的定义：每天每 g 土样中产生 1μmol NO₂ 的量为一个 S-NR 活力单位。
S-NR活性 (μmol /d/g) = C 标准×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)×V反总÷W÷T = 12×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)
注： C 标准管：标准管浓度，0.1μmol/mL；V反总：反应体系总体积，0.3mL；T：反应时间，1h=1/24d； W：样本质量，0.06g。

Soil Nitrate Reductase Assay Kit (Microanalysis)

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