S-NiR Assay Kit (Microanalysis)

Name: S-NiR Assay Kit (Microanalysis)
Brand: TargetMol
SKU: CB0267M
Rating: 5 (4 reviews)

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产品编号 CB0267M

别名 土壤亚硝酸还原酶活性检测试剂盒（微量法）

土壤亚硝酸还原酶（Solid-Nitrite reductase，S-NiR）是反硝化作用中的关键酶之一，参与亚硝酸盐至NO的还原反应，它的活性反映了生物降解过程中氮素的转化效率，为氮素转化规律的研究提供一定的依据。

规格	价格	库存	数量
100 T	¥ 1,728	10-12日内发货

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实验操作小课堂

常见问题解答

检测原理

亚硝酸还原酶可将 NO₂^- 还原为NO，使样品中参与重氮化反应生成紫红色化合物的NO₂^-减少，即540nm处吸光值的变化可反应土壤中亚硝酸还原酶的活性。

产品规格

100T/48S规格的产品组成及保存条件：

编号	规格	储存条件
CB0267M-A	4mL×1瓶	4℃保存；
CB0267M-B	粉剂×1瓶	4℃保存；临用前加4mL蒸馏水溶解。
CB0267M-C	4mL×1瓶	4℃保存。（如出现沉淀可以70-80℃加热溶解）
CB0267M-D	10mL×1瓶	4℃避光保存；（如出现沉淀可以70-80℃加热溶解）
CB0267M-E	10mL×1瓶	4℃避光保存；
CB0267M-Standard	2mL×1支	4℃保存
工作液配制	临用前根据用量将 CB0267M-D 和 CB0267M-E 以1:1的比例混合。

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

操作说明

一、自备用品：
可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、天平、水浴锅、低温离心机。

二、样本处理
新鲜土样自然风干或37度烘箱风干，过30~50目筛。

三、测定步骤：
1.分光光度计预热30min以上，调节波长至540nm，蒸馏水调零。
2.标准液的稀释：将10µmol/mL的标准溶液用蒸馏水等比稀释至0.5、0.4、0.3、0.2、0.1、0.05、0.03µmol/mL标准溶液待测。
3.样本测定，（在EP 管中依次加入下列试剂）：

	基质管	对照管	测定管	标准管	空白管
风干土样（g）		0.02	0.02
蒸馏水（μL）		40
CB0267M- A（μL）	40		40
CB0267M- B（μL）	40	40	40
混匀后，25℃反应1h
CB0267M-C（μL）	40	40	40
充分震荡30S，10000rpm，4℃，离心10min
上清液（μL）	70	70	70
标准溶液（μL）				70
蒸馏水（μL）					70
工作液（μL）	140	140	140	140	140
充分混匀，静置3min后测定540nm处吸光值，分别记为A基质管、A对照管、A测定管、A标准管和A空白管，计算ΔA测定=A基质管-（A测定管-A对照管），ΔA标准=A标准管-空白管。空白管、标准管和基质管只需测1-2次，每个测定管需设一个对照管

四、计算公式：
a. 使用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准曲线：y =1.5562x+ 0.0088，R²= 0.996；x为标准品浓度(μmol/mL)，y为吸光值(A标准管-A空白管)。
酶活单位定义：每g土样每天还原1μmol NO₂^ˉ的量为一个酶活力单位。
S-NiR (μmol /d /g土样) = [A空白管-(A测定管-A对照管) -0.0088]×V标÷1.5562÷W÷T =3.084×[A空白管-(A测定管-A对照管) -0.0088]÷W
注：T：反应时间，1h=1/24d；V标：标准液体积，0.2mL；W：样本质量，g。

b. 用96孔板测定的计算公式如下
标准曲线：y = 0.7781x+ 0.0088，R²= 0.996；x为标准品浓度(μmol/mL)，y为吸光值(A标准管-A空白管)。
酶活单位定义：每g土样每天还原1μmol NO₂^ˉ的量为一个酶活力单位。
S-NiR (μmol /d /g土样) = [A空白管-(A测定管-A对照管)-0.0088]÷0.7781×V标÷W÷T =1.234×[A空白管-(A测定管-A对照管)-0.0088]÷W
注：T：反应时间，1h=1/24d；V标：标准液体积，0.04mL；W：样本质量，g。

注意事项

1.配制好的工作液3天内使用完。
2.若吸光值超过1.5，将上清液进行适当的稀释后再加入工作液显色，并在计算公式中乘以稀释倍数。
3.严格控制显色时间，否则会对结果有影响。
4.标准曲线线性范围为0.03μmol/mL-1.5μmol/mL。
5.A空白管-（A测定管-A对照管）线性范围为0.02-1.5。
6.本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
7.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。