RuBisCO Assay Kit (UV Spectrophotometry)

Name: RuBisCO Assay Kit (UV Spectrophotometry)
Brand: TargetMol
SKU: CB0186UV
Rating: 5 (4 reviews)

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产品编号 CB0186UV

别名 二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶（RBisCO）活性检测试剂盒（紫外分光光度法）

核酮糖-1,5-二磷酸羧化酶/加氧酶（Ribulose-1,5-bisphosphate carboxylase/oxygenase，RuBisCO, EC 4.1.1.39）是一种酶，分子量约为53kD，由8个大亚基和8个小亚基组成，是植物光合作用中的一个关键酶，既控制着CO₂的固定，同时又制约着碳素向Calvin循环和光呼吸循环分流，其活性的大小直接影响着光合速率。

规格	价格	库存	数量
50 T	¥ 4,752	4-6日内发货

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实验操作小课堂

常见问题解答

检测原理

在 Rubisco 的催化下，1 分子的核酮糖-1，5-二磷酸（RuBP）与 1 分子的 CO₂ 结合，产生 2 分子的 3-磷酸甘油酸（PGA）；PGA 可通过外加的 3-磷酸甘油酸激酶和甘油醛-3-磷酸脱氢酶的作用，产生甘油醛-3-磷酸，伴随着 NADH 氧化生成 NAD⁺；在 340 nm NADH 有特征吸收峰，而 NAD⁺ 没有此吸收峰，因此测定 340nm 吸光度下降速率可以代表 Rubisco 的羧化酶活性。

产品规格

50T/48S规格的产品组成及保存条件：

编号	规格	储存条件
CB0186UV-ES	50mL×1 瓶	4℃保存；
CB0186UV-A	50mL×1 瓶	4℃保存；
CB0186UV-B	粉剂×1 瓶	-20℃保存；
CB0186UV-C	粉剂×2 瓶	-20℃保存；临用前取 1 支加入 1 mL 蒸馏水充分溶解待用，振荡溶解后若出现浑浊可以离心使用；
CB0186UV-D	粉剂×1 瓶	-20℃保存；临用前加入2mL 蒸馏水充分溶解待用；
工作液配制：	临用前在CB0186UV-B中加入 50mL CB0186UV-A，充分混匀，现配现用；

正式测定前务必取2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

操作说明

一、自备用品：
紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL 石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

二、粗酶液制备
1.按照组织质量（g）：CB0186UV-ES体积（mL）为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL CB0186UV-ES），进行冰浴匀浆。10000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
2.细菌或细胞样本的制备：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液，超声波破碎细菌或细胞（功率 20%，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；10000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

三、测定步骤：
1.分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 340nm，蒸馏水调零；
2.工作液在25℃（其它物种）孵育 5min；
3.按下表依次加入下列试剂：

试剂名称	测定管（μL）	空白管（μL）
样本	100
蒸馏水		100
CB0186UV-C	35	35
CB0186UV-D	35	35
工作液	900	900
混匀；记录 340nm 处 20 s 时吸光值 A1 和 5 min 20 s 时的吸光值 A2，计算ΔA 测定=A1 测定-A2 测定，ΔA空白=A1 空白-A2 空白，ΔA =ΔA测定-ΔA空白（空白管只做1-2次）。）

四、RuBisCO 活性计算：
1.按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：25℃中每毫克蛋白每分钟氧化1 nmol NADH为一个酶活力单位。
RuBisCO 活力 (U/mg prot) = [ΔA×V反总÷(ε×d)×10⁹]÷(V样×Cpr) ÷T = 344×ΔA÷Cpr
2.按照样本鲜重计算：
单位的定义：25℃中每 g组织每分钟氧化1 nmol NADH为一个酶活力单位。
RuBisCO 活力 (U/g 鲜重) = [ΔA×V反总 ÷(ε×d)×10⁹]÷(V样÷V样总×W)÷T =344×ΔA÷W
3.按细菌或细胞数量计算：
单位的定义：25℃中每1万个细菌或细胞每分钟氧化1 nmol NADH为一个酶活力单位。
Rubisco活力(U/10⁴ cell)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×10⁹ ]÷(V样÷V样总×500) ÷T=0.69×ΔA
注：V反总：反应体系总体积，1.07×10^-3 L；ε：NADH 摩尔消光系数，6.22×10³ L/mol/cm；d：比色皿光径，1cm；V样：加入样本体积，0.1 mL；V样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，5min；W：样本质量，g；500：细胞或细菌总数，500万；10⁹：单位换算系数1mol=10⁹nmol。