Protein Rapid Silver Stain Kit

25 T规格的产品组成如下：

注：需自备乙醇、乙酸和ddH2O。

• 高灵敏度检测：检测限可达纳克级，对于BSA蛋白，检测灵敏度可达到0.5 ng，适用于低丰度蛋白检测。
• 操作简便快捷：仅需约 90 min即可观察到蛋白条带，无需复杂的预处理或昂贵的设备。
• 背景低，条带清晰：试剂盒各组分经过优化配比，有效降低背景，提高条带清晰度。
• 兼容性强：适用于多种类型的SDS-PAGE凝胶。
• 质谱兼容：化学配方温和，可确保与质谱、测序和其他依赖脱色和蛋白质回收的下游程序的兼容性。
• 成本低廉：试剂配方经济实用，适合日常实验室使用。

SDS-PAGE 凝胶中蛋白条带的显色检测和可视化，用于观察蛋白的存在、分子量及表达情况。

1. 水洗
电泳结束后，将凝胶从玻璃板上取下，放入洁净玻璃皿中，加入足量蒸馏水，轻柔摇动（约70 rpm，以下同）洗涤3 min，以去除残余电泳缓冲液。
2. 固定
a) 配制固定液：取乙醇50 mL、乙酸10 mL、ddH2O 40 mL，混合均匀即得100 mL固定液。
b) 操作：弃去水洗液，加入约100 mL固定液，室温轻摇孵育20 min，以固定蛋白质并去除杂质。如需降低背景，固定时间可延长至40 min以上。
3. 醇洗
a) 配制醇洗液：取乙醇30 mL、ddH2O 70 mL，混合均匀即得100 mL醇洗液。
b) 操作：弃去固定液，加入约100 mL醇洗液，室温轻摇孵育10 min，进一步去除残余固定液和干扰物。
4. 水洗
弃去醇洗液，再加入ddH2O洗涤10 min，以彻底清除乙醇残留。
5. 增敏
a) 配制增敏液：取Silver Stain Sensitizer Ⅰ (100×) 1 mL、Silver Stain Sensitizer Ⅱ (5×) 20 mL、乙醇 30 mL、ddH2O 49 mL，混合均匀即得100 mL增敏液。注意现配现用。
b) 操作：弃去水洗液，加入约100 mL增敏液，室温摇动孵育 5 min，使蛋白条带的银结合位点充分暴露，增强染色灵敏度。
6. 水洗
弃去增敏液，用ddH2O洗涤2次，每次1 min，以去除未结合的试剂。
7. 银染
a) 配制银染液：取Silver Stain (100×) 1 mL、ddH2O 99 mL，混合均匀即得100 mL银染液。注意现配现用。
b) 操作：弃去水洗液，加入约100 mL银染液，避光室温轻摇孵育10 min，使蛋白与银离子结合。
8. 水洗
弃去银染液，用ddH2O洗涤1 min，以减少背景。
9. 显色
a) 配制显色液：取Silver Stain Developer Ⅰ (5×) 20 mL、ddH2O 80 mL，混匀均匀，临用前加入 Silver Stain Developer Ⅱ (1000×) 100 μL，即得100 mL显色液。注意现配现用。
b) 操作：弃去水洗液，加入约100 mL显色液，轻摇显影3–10 min，实时观察条带出现情况。当蛋白条带达到理想强度时，立即进入下一步终止反应。
10. 终止显色
a) 配制终止液：取Silver Stain Terminator (20×)、ddH2O 95 mL，混匀即得100 mL终止液。注意现配现用。
b) 操作：弃去显色液，加入约100 mL终止液，轻摇10 min，终止显影反应并稳定条带。
11. 保存
弃去终止液，用5%乙酸洗涤10 min，去除试剂。染色完成后，样品可直接用于后续分析（如凝胶成像或质谱检测）。如需长期存放，可将银染凝胶置于4°C的1%乙酸溶液中保存，防止变色或背景加深。
注：推荐使用乙酸溶液进行洗涤与保存，因为显色液呈碱性，乙酸可以中和显色液，且乙酸具有轻微固定作用，可以防止蛋白长期保存从而扩散。

室温保存，一年有效。

1. 银染对杂质非常敏感，注意使用高纯度的水，所有用于银染的器皿必须彻底清洗干净，严禁使用含有金属离子残留或清洗剂残留的容器，以防发生非特异性沉淀或产生背景染色。
2. 显色反应速度较快，应在显色阶段持续观察凝胶变化，待蛋白条带清晰可见后立即进行终止，以防过度显色导致背景过深或条带模糊。
3. 银离子具有光敏性，银染及显色步骤应在避光条件下进行（可使用铝箔覆盖容器），以避免非特异性显色或背景加深。
4. 各步骤间的洗涤应充分，尤其是固定、增敏、银染后的水洗步骤，可有效去除残留离子和杂质，确保条带清晰。但也不可过度洗涤，否则可能会导致银染灵敏度降低。
5. 建议在室温（20–25°C）条件下进行操作，温度过高可能加速显色反应，影响可控性。
6. 银染液具有腐蚀性，显影液Ⅱ具有易燃性，请小心操作，注意防护。
7. 说明书中各溶液的推荐用量适用于尺寸为8×10 cm、厚度0.75–1 mm的凝胶。若使用更大面积的凝胶，应按凝胶面积比例相应增加各溶液体积；若凝胶更厚，则需根据厚度适当延长各步骤的作用时间，以确保染色充分。
8. 本品仅适用于专业科研用途，严禁用于临床诊断、治疗、食品或药品领域，且不得存放于住宅等非专业场所。
9. 为保障操作安全与人员健康，操作时请务必穿戴实验服并佩戴一次性手套。

• C0197-蛋白快速银染试剂盒说明书-中文(1.34 MB)