PGK Assay Kit (UV Spectrophotometry)

Name: PGK Assay Kit (UV Spectrophotometry)
Brand: TargetMol
SKU: CB0118UV
Rating: 5 (4 reviews)

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产品编号 CB0118UV

别名 3-磷酸甘油酸激酶活性检测试剂盒（紫外分光光度法）

3-磷酸甘油酸激酶（3-Phosphoglycerate kinase，PGK）是糖酵解的关键酶，广泛存在于动植物和微生物体内，催化1，3-二磷酸甘油酸转变为3-磷酸甘油酸，产生1分子ATP，具有影响DNA复制和修补及刺激病毒RNA合成等生物学功能，广泛应用于药物靶标设计。

规格	价格	库存	数量
50 T	¥ 7,140	10-12日内发货

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实验操作小课堂

常见问题解答

检测原理

3-磷酸甘油酸激酶催化3-磷酸甘油酸和ATP产生1,3-二磷酸甘油酸和ADP，1,3-二磷酸甘油酸在3-磷酸甘油醛脱氢酶和NADH作用下产生3-磷酸甘油醛、NAD和磷酸，340nm处的吸光度变化反映了3-磷酸甘油酸激酶的活性的高低。

产品规格

50T/48S规格的产品组成及保存条件：

编号	规格	储存条件
CB0118UV-ES	50mL×1瓶	4℃保存；
CB0118UV-A	25mL×1瓶	4℃避光保存；
CB0118UV-B	粉剂×1瓶	-20℃避光保存。临用前加5mL蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
CB0118UV-C	粉剂×1瓶	-20℃避光保存。临用前加2.5mL蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
CB0118UV-D	粉剂×1瓶	-20℃避光保存。临用前加2.5mL蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
CB0118UV-E	粉剂×1瓶	-20℃避光保存；临用前加10 mL蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。

正式测定前务必取2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

操作说明

一、自备用品：
紫外分光光度计、低温台式离心机、水浴锅、1 mL石英比色皿、天平、研钵、冰和蒸馏水。

二、酶液提取
1.组织：按照组织质量（g）：提取液体积（mL）为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL CB0118UV-ES）进行冰浴匀浆，然后 10000g，4℃，离心 10min，取上清置于冰上待测。
2.细胞：按照细胞数量（10⁴个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细胞加入 1mL CB0118UV-ES），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7 秒，总时间 3min）；然后 10000g，4℃，离心 10min，取上清置于冰上待测。
3.血清（浆）等液体：直接检测。若有浑浊则离心后取上清测定。

三、测定步骤：
1.紫外分光光度计预热30min，调节波长至340nm，蒸馏水调零。
2.取1ml石英比色皿依次加入：

试剂名称	测定管（µL）
CB0118UV-A	500
CB0118UV-B	100
CB0118UV-C	50
CB0118UV-D	50
CB0118UV-E	200
粗酶液	100
充分混匀，记录340nm处10s的吸光值A1，然后迅速置于37℃水浴或培养箱5min，拿出迅速擦干测定310s时的吸光值A2，计算△A=A1-A2

四、计算公式：
1.按照样本蛋白浓度计算
酶活单位定义：每毫克组织蛋白每分钟消耗1nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
PGK (U/mg prot) = ΔA÷(ε×d)×V反总×10⁹÷(V样×Cpr)÷T = 321.54×ΔA÷Cpr
2.按照样本质量计算
酶活单位定义：每克组织每分钟消耗1nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
PGK (U/g 鲜重) = ΔA÷(ε×d)×V反总×10⁹÷(W ×V样÷V样总)÷T = 321.54×ΔA÷W
3.按照液体体积计算
酶活单位定义：每 mL 血清(浆)每分钟消耗 1nmol 的 NADH 定义为一个酶活力单位。
PGK(U/mL)=ΔA÷(ε×d)×V反总×10⁹÷V样÷T=321.54×ΔA
4.按照细胞数量计算
酶活单位定义：每 10⁴ 个细胞每分钟消耗 1nmol 的 NADH 定义为一个酶活力单位。
PGK(U/10⁴cell)=ΔA÷(ε×d)×V反总×10⁹÷(N×V样÷V样总)÷T=321.54×ΔA÷N
注：V反总：反应体系总体积，1×10^-3L；ε：NADH摩尔消光系数，6.22×10³ L/mol/cm；d：比色皿光径，1cm；V样：加入样本体积，0.1mL；V样总：加入提取液体积，1mL；T：反应时间，5 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；N：细胞数量，以万计；10⁹：单位换算系数，1mol=10⁹nmol。