PGK Assay Kit (Microanalysis)

3-磷酸甘油酸激酶催化3-磷酸甘油酸和ATP产生1,3-二磷酸甘油酸和ADP，1,3-二磷酸甘油酸在3-磷酸甘油醛脱氢酶和NADH作用下产生3-磷酸甘油醛、NAD和磷酸，340nm处的吸光度变化反映了3-磷酸甘油酸激酶的活性的高低。

100T/96S规格的产品组成及保存条件：

正式测定前务必取2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

一、自备用品：
紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板（UV板）、天平、低温离心机、研钵、冰和蒸馏水。

二、酶液提取
1.组织：按照组织质量（g）：提取液体积（mL）为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL CB0118M-ES）进行冰浴匀浆，然后 10000g，4℃，离心 10min，取上清置于冰上待测。
2.细胞：按照细胞数量（10⁴ 个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细胞加入 1mL CB0118M-ES），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7 秒，总时间 3min）；然后 10000g，4℃，离心 10min， 取上清置于冰上待测。
3.血清/血浆：直接检测，若有浑浊则离心后取上清测定。

三、测定步骤：
1.紫外分光光度计/酶标仪预热30min，调节波长至340nm，蒸馏水调零。
2.取微量石英比色皿/96孔板（UV板），依次加入：

四、计算公式：
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
1.按照样本蛋白浓度计算
酶活单位定义：每毫克组织蛋白每分钟消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
PGK (U/mg prot) = ΔA÷(ε×d)×V反总÷(V样×Cpr)÷T = 321.54×ΔA÷Cpr
2.按照样本质量计算
酶活单位定义：每克组织每分钟消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
PGK (U/g 鲜重) = ΔA÷(ε×d)×V反总÷(W ×V样÷V样总)÷T = 321.54×ΔA÷W
3.按照液体体积计算
酶活单位定义：每 mL 血清(浆)每分钟消耗 1nmol 的 NADH 定义为一个酶活力单位。
PGK(U/mL)=ΔA÷(ε×d)×V反总×10⁹÷V样÷T=321.54×ΔA
4.按照细胞数量计算
酶活单位定义：每 10⁴ 个细胞每分钟消耗 1nmol 的 NADH 定义为一个酶活力单位。
PGK(U/10⁴ cell)=ΔA÷(ε×d)×V反总×10⁹÷(N×V样÷V样总)÷T=321.54×ΔA÷N
注：V反总：反应体系总体积，2×10^-4L；ε：NADH摩尔消光系数，6.22×10³ L/mol/cm；d：比色皿光径，1cm；V样：加入样本体积，0.02mL；V样总：加入提取液体积，1mL；T：反应时间，5 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；N：细胞数量，以万计；10⁹：单位换算系数，1mol=10⁹nmol。
b. 用96孔板测定的计算公式如下
将上述公式中的 d-1cm 改为 d-0.5cm(96孔板)进行计算即可。

1.本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
2.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。